Meme kanserine karşı HER2/Neu antijeni ve saponin adjuvanı içeren aşı kombinasyonunun geliştirilmesi
Yükleniyor...
Tarih
2018
Yazarlar
Dergi Başlığı
Dergi ISSN
Cilt Başlığı
Yayıncı
Ege Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü
Erişim Hakkı
info:eu-repo/semantics/openAccess
Özet
Günümüz meme kanser vakalarının %20’sini HER2 pozitif meme kanseri oluşturmaktadır. Normal hücrelerde epitel büyüme faktör reseptörü görevi olan HER2, kanser hücrelerinde overeksprese olmakta ve kanseri ve kanseri oldukça agresif bir foruma dönüşmektedir. Günümüz kanser tedavi yöntemleri hasta vücudunda birçok yan etkiyi de beraberinde getirmektedir. Bu nedenden dolayı, güncel kanser tedavi araştırma çalışmaları immünoterapötik yöntemlere yönelmiştir. İmmünoterapi, kısaca vücudun bağışıklık sistemini kullanarak kanser hücrelerine karşı tetikleme yöntemi olarak bilinmektedir.
Yürütülen tez çalışmasında, yeni bir kombinasyon immünoterapi modeli olarak HER2/Neu antijenni yüklenen dedritik hücre bazlı aşı ile saponın adjuvanını (QS-21) birlikte kullanarak bir kombinasyon immünoterapi modeli geliştirilmeye çalışılmıştır. Çalışmada anti–PD-L1 monoklonal antikoru ve kemoteropötik ajan olan doksorubisin içeren farklı formülasyonlar da çalışmaya dahil edilmiştir. Bu aşı sayeside hem bağışıklık hücrelerinin tümöre karşı tetiklenmesi, hemde tümör hücrelerinin immün sistemden evazyonunun englllenmesi hedeflenmiştir.
Yürütülen tez çalışması 2 ana deney seti kurularak gerçekleştirilmiştir. Kurulan ilk deney setinde, aktif immünoterapi ile pasif immünoterapi birlikte kullanılmıştır. İlk deney setinde 1.5x106 hücre/ml HER2 pozitif 4T1 hücreleri 6-8 haftalık farelere çalışmalının 0. Gününde Xenograft model oluşturulmuş ve aşılama prosedürü 1. Gün başlayıp; haftada 1 kere toplam 2 hafta boyunca uygulanmıştır. Çalışmada anti-PD-L1 monoklonal antikoru ise 4. Ve 9. günlerde farelere uygulanmıştır.
İkinci deney setinde ise aktif ve pasif immünoterapi yaklaşımlarına ek olarak kemoterapötik bir ajan olan doksorubisin de eklemiştir. İkinci deney setinde ise 5x106 hücre/ml HER2
Pozitif 4T1 hücreleri 6-8 haftalık farelere çalışmanın 0. Gününde enjekte edilmiş, ve aşılama prosedürü 4. Gün başlayıp; haftada 1 kere toplam 2 hafta bıyunca uygulanmıştır. Çalışmada anti-PD-L1 monoklanal antikoru ise 4. ve 9. günlerde farelere uygulanmıştır. Doksorubisin ise, çalışmanın 5. ve 10. günlerinde farelere uygulanmıştır.
Çalışma sonunda sakrifiye edilen farelerin ağırlıkları ve tümör boyut ölçümü yapıldıktan sonra tümör, dalak dokuları ve kan örnekleri toplanmıştır. Kullanılan aşı kombinasyon etkinliğini belirlemek amacı ile LDH, assay, folow sitometri ile CD8+ T hücre, ELISA ile HER2 spesifik antikor (IgG, IgG1, IgG2a) tayini ve immünohistokimya (CD4+, CD8+, CD61+) çalışmaları yürütülmüştür.
Çalışmada farklı aşı kombinasyonu denenmiş ve elde edilen bulgularda etkili aşı kombinasyonlarında tümör hacimlerinde anlamlı küçülmeler gözlemlenmiştir. İlk çalışmada DH+HER2/Neu+QS-21+anti-PD-L1 kombinasyonu en etkili kombinasyon olarak öne çıkmış ve LDH spesifik Sitotoksite çalışmasında %35-40 hücre ölümüne neden olmuştur. Uygulanan aynı formülasyona ait fare grubundan alınan kan serum örneklerinde anti-HER2 antikor titresi anlamlı düzeyde yüksek çıkmış, ve bu gruba ait total CD8+T hücre popülasyonu ile IFN-γ salgılayan CD(+ T hücre popülasyonunda kontrol ile diğer aşı gruplarına göre anlamlı farklar elde edilmiştir. Bunun yanı sıra CD4+, CD8+ ve CD61+ hücre popülasyonlarının incelendiği immünohistokimya çalışmaları ile elde edilen bulgular birbiriyle paralel olmaktadır. En etkili formülasyon olarak bulunan gruba ait olan tümör kesitlerinde immün hücre popülasyonunda diğer gruplara göre artış olduğu gözlemlemiştir. Yürütülen 2. Çalışmada ise en etkili kombinasyon Doksorubisin+DH+HER2/Neu+QS-21+anti-PD-L1 kombinasyonu olarak öne çıkmış ve LDH spesifik sitotoksite çalışmasında %45-50 hücre ölümüne deneden olmuştur. Uygulanan ayni formülasyona ait fgare grubundan alınan kan serum örneklerinde anti-HER2antikor titresi anlamlı bir şekilde yüksek çıkmış, ve bu gruba ait total CD8+ T hücre popülasyonu ile IFN-γ salgılayan CD8+ T hücre popülasyonunda anlamlı farklar elde edilmiştir. Bunun yanı sıra CD4+, CD8+, ve CD61+ hücre popülasyonlarının bakıldığı immünohistokimya çalışmaları ile elde edilen bulgular birbirine paralel olmaktadır. En etkili formülasyon olarak bulunan gruba ait tümör kesitlerinde immün hücre popülasyonunda diğer gruplara göre artış olduğu gözlemlenmiştir.
Kullanılan immün kontrol noktası inhibisyonuna neden olan mAb’ı ile aşı etkinliğinin arttığı gözlemlenmiş ve kullanılan aktif immünoterapi ajanı olan dendrtik hücrenin etkinliğini de artırdığı belirlenmiştir. Kemoterapi ile birlikte kullanıldığında ise immünoterapötik kombinasyonun etkidi daha da artmıştır.
Açıklama
Anahtar Kelimeler
HER2, Peptid Aşısı, 4T1-HER2, Doksorubisin, İmmünoterapi, Dendritik Hücre, PD-L1, Meme Kanseri, Peptide Vaccine, 4T1-HER2, Doxorubicin, İmmunotherapy, Dendritic Cell, PD-L1, Breast Cancer
