Dasatinib ile indüklenmiş KML hücre dizisi (K562) apoptozunun JAK-STAT yolağı üzerine etkisinin araştırılması
Küçük Resim Yok
Dosyalar
Tarih
2014
Yazarlar
Dergi Başlığı
Dergi ISSN
Cilt Başlığı
Yayıncı
Ege Üniversitesi
Erişim Hakkı
info:eu-repo/semantics/openAccess
Özet
JAK/STAT sinyal yolağında görevli STAT5A ve S5B genleri sinyal iletiminde ve malinitede ekspresyonu artan genlerin aktivasyonunda görevli nükleer transkripsiyon faktörleridir ve hematolojik hastalıklarda aktifleşerek lösemi gelişiminde rol alırlar. Dasatinib, BCR-ABL, SRC ailesi (SRC, LCK, YES, FYN),c-KIT,EPHA2 ve PDGFR kinazları inhibe ederek ve SRC kinaz ailesini (LYN, HCK) kapsayan iletim yolaklarını aktive ederek, BCR-ABL kinaz bölgesi mutasyonlarının ve MDR geninin fazla eksprese olmasından kaynaklanan imatinib direncini kırar. Bu çalışmanın amacı, potansiyel hedef olan JAK/STAT yolağı elemanlarından STAT5A ve STAT5B'nin dasatinib uygulaması sonrasında mRNA düzeyindeki transkripsiyon değişimini ve lösemi hücrelerinin apoptotik durumunu KML hücre modeli K-562 hücreleri üzerinden incelemektir. YÖNTEM-GEREÇ: Dasatinib' in K-562 hücreleri üzerinde sitotoksik etki oluşturduğu IC50 dozu XTT yöntemiyle belirlenmiş, belirlenen doz uygulandıktan 24-96. saatler için hücrelerin apoptotik durumu "Cell Death Detection kit" ile spektrofotometrik olarak değerlendirilmiştir. Hedef genlerin ekspresyon seviyeleri dasatinib uygulamasını takiben eş zamanlı olarak qRT-PCR ile saptanmıştır. Protein ekspresyon analizleri 'WesternBreeze Chromogenic Kit-Anti-Rabbit' kitin uygulama esaslarına dayanarak western blot analizi ile belirlenmiştir.İstatistik analizler GraphPad prism metodu ile anlamlılık düzeyi p<0.05 kullanılarak değerlendirilmiştir. BULGULAR: Dasatinib' in IC50 dozu, 48. saat için 3.3 nM olarak belirlenmiştir. Dasatinib uygulanmış ve uygulanmamış hücrelerin apoptotik durumu kıyaslandığında; muamele grubu hücrelerde 96. saatte 4.5 katlık anlamlı bir apoptoz indüksiyonu saptanmıştır (p<0.0001). Hedef genlere ait mRNA ekspresyon seviyeleri kıyaslandığında, STAT5A ekspresyonu 96. saatte 1.5 katlık (%33.2 oranında) anlamlı bir azalma sergilemişken (p=0.02); aynı saatte STAT5B ekspresyonunda, 4.47 katlık (%77.6 oranında) azalma belirlenmiştir (p<0.001). STAT5A ve STAT5B protein ekspresyon seviyeleri 96.saatte anlamlı olarak baskılanmıştır ve bu sonuçlar mRNA ekspresyon sonuçları ile korele saptanmıştır.;STAT, Dasatinib, CML, Apoptosis.;STAT, Dasatinib, KML, Apoptoz.
Açıklama
Araştırmacılar; Burçin Tezcanlı Kaymaz, Ayşegül Dalmızrak, Fahri Şahin, Buket Kosova
Araştırma Projesi -- Ege Üniversitesi, 2014
Araştırma Projesi -- Ege Üniversitesi, 2014
