Galleria Mellonella (Lepidoptera)’da beyin nörosekresyon hücrelerinde mikroskobik (floresan ve elektron) ve analitik (Cap LC-ESI-MS/MS) yöntemlerle sialik asit belirlenmesi
Yükleniyor...
Dosyalar
Tarih
2011
Yazarlar
Dergi Başlığı
Dergi ISSN
Cilt Başlığı
Yayıncı
Ege Üniversitesi
Erişim Hakkı
info:eu-repo/semantics/openAccess
Özet
Bu çalışma da Galleria mellonella'nın Pars İnterserebralis (PIC) bölgesi ve nörosekresyon hücrelerinde (NSC) sialik asidin varlığı aranmıştır. Bu amaçla mikroskobik (Floresan ve elektron mikroskoplar, sırasıyla FM ve TEM) ve analitik (cap ESİ-LC-MS/MS) yöntemler kullanılmıştır. Mikroskobik yöntemler lektinlerin şekerleri seçici tanımasına dayanır. FM'de, frozen kesitlere ve lowicryl'e gömülmüş örneklerden alınan yarı ince kesitlere tüm sialik asit (Sia) tiplerini tanıyan Limulus polyphemus agglutinin (LPA) lektini uygulanmıştır. 3., son ve ergin evre beyinlerinden alınan frozen kesitlerde floresan ışıma PIC bölgesinde geniş bir alanda ve beyni dıştan saran nöral lamella veya stromada görülmüştür. Lowicryl'e gömülmüş beyinlerden alınan yarı ince kesitlere Sia'ların glikozidik bağ tipini de tanıyan altın bağlı lektinler Sambucus nigra agglutinin (SNA) Maackia amurensis agglutinin (MAA) uygulanmıştır. Elde edilen floresan ışımalar ?-2,3 ve ?-2,6 glikozidik bağla bağlanan Sia'ların PIC bölgesinde bulunduğunu işaret etmektedir. 3.evre, son evre larva ve 6.gün pupa'nın lowicryl'e gömülmüş örneklerinden alınan ince kesitlere TEM de incelemek amacıyla glikozidik bağ tipini tanıyan altın bağlı lektinler uygulanmıştır. MAA-bağlı altın partikülleri 3. ve son evre larva NSC hücrelerinin nukleuslarında kromatine bağlı, sitoplazmalarında ise sitosolde, nörosekresyon granüllerinde mitokondrilerde ve lipit vakuollerde yer almaktadır. NSC'leri incelenen iki evrede de, MAA-bağlı altın partikülleri SNA-bağlı altın partiküllerinden daha fazla bulunmuştur. Genç (3.evre larva) ve yaşlı (son evre larva) evreler karşılaştırıldığında hem MAA ve hem de SNA-bağlı altın partikülleri genç hücrelerde daha boldur. TEM incelemeleri sonucunda son evre larva NSC'lerinde; ?-2,6 bağlı Sia'ların yok denecek kadar azaldığı, ?-2,3 bağlı Sia'ların ise yine azaldığı fakat bulunmaya devam ettiği gözlemlenmiştir. Analitik yöntemle elde edilen sonuçlar mikroskobik yöntemlerle elde edilen sonuçları desteklemektedir. Belirlenen Sia tipi Neu5Ac ve Neu5Gc9Ac dir. Neu5Ac 7.6 ng/mg ile en fazla 3. evre PIC bölgesinde saptanmıştır. Son evre larva'da PIC bölgesi için bu değer 1.1 ng/mg ve 6.gün pupa'da 1.5 ng/mg ölçülmüştür. Ergin yapılanmanın devam ettiği pupal evrenin ikinci yarısındaki böceklerde, 3. evrede bulunanlardan önemli ölçüde az olmakla birlikte, son evre larvaya göre hafif bir artış görülmüştür. Sonuç olarak; NSC'de sialik asit bulunmaktadır. İlerleyen yaşla hücrelerde ? 2,6 bağlı Sia yok denecek kadar azalırken ? 2,3 bağlı Sia azalarak bulunmaya devam eder. PIC bölgesinde ise yaşlanan dokuda Sia tipleri ve konsantrasyonları azalmaktadır.
Açıklama
Anahtar Kelimeler
Sialik asit, Nörosekresyon hücreler, Lektin, Transmisyon elektron mikroskobu, LC-MS/MS, Floresan mikroskobu, Altın işaretleme, Galleria mellonella, Böcek., Sialic acid, Neurosecretory cells, Lectin, Transmission electron microscope, LC-MS/MS, Fluorescence microscope, Gold labeling Galleria mellonella, Insect., Biyoloji A.B.D.
