MIA PaCa-2 pankreas duktal adenokarsinom hücre hattında kalsiyum ve gemsitabinin kombine etkilerinin incelenmesi

Basit Öğe Kaydı
dc.contributor.authorBiray Avcı, Çığır
dc.contributor.investigatorBayburt, Gizem Hande
dc.date.accessioned2025-06-17T11:43:47Z
dc.date.available2025-06-17T11:43:47Z
dc.date.issued2024
dc.departmentEge Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Temel Bilimler Bölümü, Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
dc.description.abstractPankreas kanseri, ölüm oranı neredeyse insidans oranına eşit olan dünyadaki en fatal malignitelerden biridir. Tanı koyulduktan sonra 5 yıllık hayatta kalım oranı %1 ile %14 arasında değişkenlik gösterir. Cerrahi rezeksiyon hala küratif tedaviyi sağlayabilecek tek yaklaşımdır ancak sadece hastaların %10-20'si için uygundur. Cerrahi rezeksiyon ardından adjuvan kemoterapide bir numaralı terapötik çözüm olarak kullanılan Gemsitabin (2',2'-diflorodeoksisitidin / dFdC, GEM), hücrede DNA sentezini inhibe ederek farmakolojik etki gösteren bir nükleozid analoğudur. E-kaderinler, Ca+ bağımlı hücre-hücre bağlantı proteinleridir. E-kaderin ekspresyonundaki azalmanın özellikle solid tümörlerin ilerlemesine katkıda bulunduğu bilinmektedir. Kalsiyum'un (Ca), E-kaderin ekspresyonunu pozitif yönde değiştirerek tümör hücrelerinin giderek daha kötü huylu bir fenotipe doğru evrilmesini engelleyebileceği meme kanseri üzerine yapılan bir çalışmada kanıtlanmıştır. Yapılması önerilen bu araştırma projesinde, kematerapötiklerin ve mevcut tedavilerin yetersizliği gibi problemler göz önünde bulundurularak, pankreas kanserinin kötü progresyonunu en aza indirmek amaçlanmıştır. İlk olarak pankreas kanser modeli olarak MIA PaCa-2 (pankreas duktal adenokarsinomu hücre hattı) hücreleri kullanılmıştır. Araştırmada, yalnızca Ca ve yalnızca GEM'in ayrı ayrı ve kombinasyon halinde etkilerinin incelenebilmesi için 4 grup oluşturulmuş ve yapılması planlanan tüm diğer analizler bu 4 grup üzerinden gerçekleştirilmiştir. Deney gruplarındaki hücrelerin sitotoksisitenin değerlendirilebilmesi için WST-8 testi yapılmış, apoptozun değerlendirilebilmesi için FITC Annexin V, hücre döngüsü ise Cycyle test plus DNA Reagent kit ile değerlendirilmiştir. Hücrelerdeki hücre döngüsü apoptoz regülatör gen ifadeleri ve Ekaderin ekspresyonunun analizi için öncelikle RNA izolasyonu, ardından cDNA sentezi yapılarak, gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (RT-PCR) ile analiz yapılmıştır. GEM'in MIA PaCa-2 hücrelerinde 24, 48 ve 72. saatte IC50 değeri sırasıyla 149.17 μM, 47.25 μM ve 21.43 μM, ayrıca Ca'un ise 468.30 μM, 383.33 μM ve 54.25 μM olduğu belirlenmiştir. kombinasyonu synergyfinder programı ile ZIP metodu kullanılarak değerlendirildiğinde GEM'in 48. Saatte 47.25 μM'dan 12,5 μM'a, Ca'un ise 48. Saatte 383, 32 μM'dan 75 μM'a indiği belirlenmiştir. GEM için doz azaltma indeksinin 3,78, Ca için ise 5,11 olduğu belirlenmiştir. Kontrol grubuna kıyasla GEM uygulanan grupta apoptoz 4,34 kat indüklenirken, Ca uygulanan grupta 1,62 kat, kombinasyon grubunda ise 7,46 kat indüklenmiştir. Hücre döngüsü progresyonu incelendiğinde kontrole kıyasla her üç grupta da S ve G2/M arresti gözlemlenmiştir. Gen ekspresyon analizinde intrinsik yolak kaynaklı apoptoz yolağındaki genlerde ifade artışı saptanırken, hücre döngüsü regülatörlerinde değişklikler gözlemlenmiştir. Ayrıca E-kaderinin kombinasyon uygulaması ile ifadesinin arttığı belirlenmiştir. Bu sonuçlar Ca'un GEM ile eşzamanlı uygulamasının pankreas kanserinde terapötik potansiyele sahip olduğunu işaret etmektedir.
dc.description.abstractPancreatic cancer, one of the most fatal malignancies globally, poses a complex challenge to clinical approaches and prognosis, with a death rate nearly equivalent to its incidence rate. The 5-year survival rate after diagnosis ranges between 1% and 14%. Surgical resection remains the only curative approach, but it is applicable to only 10-20% of patients. Gemcitabine (2',2'-difluorodeoxycytidine / dFdC), utilized as the primary therapeutic solution in adjuvant chemotherapy after surgical resection, is a nucleoside analog that pharmacologically exerts its effects by inhibiting DNA synthesis in cells. E-cadherins are calcium-dependent cell-cell adhesion proteins, and a decrease in Ecadherin expression is known to contribute to the progression of solid tumors. A study on breast cancer has demonstrated that calcium can positively alter E-cadherin expression, preventing tumor cells from evolving towards a more malignant phenotype. In this proposed research project, aiming to mitigate the aggressive progression of pancreatic cancer considering issues such as the inadequacy of chemotherapeutics and existing treatments, a pancreatic cancer model using MIA PaCa-2 cells (pancreatic ductal adenocarcinoma cell line) was initially employed. To investigate the effects of calcium alone, gemcitabine alone, and their combination, four groups were created, and all planned analyses were conducted based on these four groups. The WST-8 test assessed cytotoxicity, FITC Annexin V evaluated apoptosis, and the Cell Cycle Test Plus DNA Reagent kit analyzed the cell cycle for cells in the experimental groups. For the analysis of gene expressions of apoptosis regulators and E-cadherin, RNA isolation, followed by cDNA synthesis, was performed, and real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) was conducted. Gemcitabine's IC50 values for MIA PaCa-2 cells at 24, 48, and 72 hours were determined as 149.17 μM, 47.25 μM, and 21.43 μM, respectively, while calcium's values were 468.30 μM, 383.33 μM, and 54.25 μM. Using the synergyfinder program and the ZIP method, the combination of gemcitabine and calcium showed a decrease from 47.25 μM to 12.5 μM for gemcitabine and from 383.32 μM to 75 μM for calcium at 48 hours. The dose reduction index was calculated as 3.78 for gemcitabine and 5.11 for calcium. Compared to the control group, apoptosis induction was 4.34-fold in the gemcitabine group, 1.62-fold in the calcium group, and 7.46-fold in the combination group. Cell cycle progression revealed S and G2/M arrest in all three groups compared to the control. Increased expression was observed in genes of the intrinsic pathway of apoptosis, and alterations were noted in cell cycle regulators in the gene expression analysis. Additionally, E-cadherin expression increased with the combination application. These results indicate the therapeutic potential of simultaneous application of calcium with gemcitabine in pancreatic cancer.
dc.identifier.urihttps://hdl.handle.net/11454/117564
dc.language.isotr
dc.publisherEge Üniversitesi
dc.relation.publicationcategoryProject
dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/closedAccess
dc.subjectGen Ekspresyonu
dc.subjectKanser
dc.subjectFenolik Bileşik
dc.subjectKromatin Modifikatör Enzim
dc.subjectHiston proteinleri.
dc.subjectGene Expression
dc.subjectCancer
dc.subjectPhenolic Compound
dc.subjectChromatin Modifier Enzyme
dc.subjectHistone proteins.
dc.subject.classification24166
dc.titleMIA PaCa-2 pankreas duktal adenokarsinom hücre hattında kalsiyum ve gemsitabinin kombine etkilerinin incelenmesi
dc.typeProject

Dosyalar

Lisans paketi
Listeleniyor 1 - 1 / 1
Küçük Resim Yok
İsim:
license.txt
Boyut:
1.17 KB
Biçim:
Item-specific license agreed upon to submission
Açıklama:
İndir

Koleksiyon

Araştırma Projeleri Koleksiyonu