Trabectedin molekülünün (ET-743) meme kanseri hücre kültürlerindeki sitotoksik, apoptotik ve epigenetik etkilerinin araştırılması
Küçük Resim Yok
Tarih
2013
Dergi Başlığı
Dergi ISSN
Cilt Başlığı
Yayıncı
Ege Üniversitesi
Erişim Hakkı
info:eu-repo/semantics/closedAccess
Özet
Breast cancer, Trabectedin, cytotoxicity, apoptosis, epigenetic.;Meme kanseri, Trabectedin, sitotoksisite, apoptozis, epigenetik.;Trabectedin (ET-743), Ecteinascidia turbinata'dan (deniz fıskiyesi) 1969 yılında izole edilen antikanser bir moleküldür. Günümüzde ise sentetik olarak üretilen bu molekül, 2007 yılında yumurtalık kanseri ve yumuşak doku sarkomlarında tek başına veya mevcut kemoterapötiklerle kombine olarak kullanılmaya başlanmıştır. Ancak, Trabectedin'in çeşitli kanser hücre hatlarında hangi yolaklar üzerinden etki gösterdiği büyük ölçüde aydınlatılmayı beklemektedir. Bu çalışmanın amacı, insan normal meme (MCF-10A) ve meme kanseri hücre kültürlerinde (MDA-MB-453 ve MCF-7) etkinliği gösterilmemiş olan trabectedin molekülünün olası sitotoksik, apoptotik, hücresel stres ve epigenetik etkinliğinin güncel moleküler yöntemler kullanarak detaylı şekilde ortaya konmasıdır. Trabectedin'in hücre çoğalmasını engelleyici etkisi XTT yöntemi kullanılarak gösterildi. Sitotoksik etkinin apoptozis üzerinden gerçekleşip gerçekleşmediği ise DNA fragmentlerini ölçen ELISA tabanlı bir kit kullanılarak belirlendi. Apoptotik etkinin doğrulanması için mitokondriyal membran potansiyeli ölçümü, Tetrametilrodamin etil ester (TMRE) boyası kullanıldı. Apoptozisin hangi moleküller üzerinden gerçekleştiğine dair hipotez üretebilmek için ön çalışma olarak ELISA tabanlı, apoptozisle ilişkili 35 molekül içeren "apoptozis antibody array" (çoklu western blot) yöntemi kullanıldı. Ekspresyonları anlamlı değişen moleküller seçilerek western blot ve PCR yöntemleriyle deneyler doğrulandı. Trabectedin'in hücre içi redüksiyon/oksidasyon dengesini etkileyip etkilemediği ise reaktif oksijen türevlerinin ölçümü ve glutatyon s transferaz enzim aktivitesinin ölçümü ile belirlendi. Trabectedin molekülünün meme kanseri hücrelerindeki epigenetik hafızayı etkileyip etkilemediği histon deasetilaz ve DNA metiltransferaz enzim aktivitelerinin ölçümü ile araştırıldı. Her hastada ve hatta hastalığın her evresinde farklı genotipik ve fenotipik özellikler gösteren bir hastalık özelliğinde olan meme kanseri tedavisinde yeni tedavi protokollerinin araştırılması, yeni ilaçların ortaya koyulması ve bu ilaçların moleküler mekanizmalarının meme kanserinin hücresel düzeydeki modeli olan model hücre hatlarında aydınlatılması meme kanserinin tedavisine önemli katkılar sunacaktır.
Açıklama
Araştırma Projesi -- Ege Üniversitesi, 2013
