Thermobifida fusca EFTL17 suşundan lipaz/esteraz genlerinin ekspresyonu ve rekombinant enzimlerin karakterizasyonu

Bu çalışmada, Thermobifida fusca EFTL17 suşundan lipaz/esteraz kodlayan gen farklı protein ekspresyon (ifade) kitleri ile karşılaştırmalı olarak çalışıldı. Bu karşılaştırmanın gerçekleştirilmesi için her bir kite uygun primerler tasarlandı ve çalışmada kullanıldı. Bu protein ifade kitlerinden Thermobifida fusca EFTL17 suşunun lipaz/esteraz geni için en uygun klonlama ve ifade sisteminin ligasyondan bağımsız klonlama ve ekspresyon sistemin uygun olduğu saptanmıştır. Bu sistemle uyumlu Escherichia coli BL21(DE3) pLysS suşunda ifade edilmiştir. İfade edilen rekombinant protein, Ni-affinite saflaştırma sistemi kullanılarak saflaştırılmıştır. Rekombinant enzimin optimum aktivite gösterdiği sıcaklık 65 - 75{486}C aralığında olduğu ve pH değerinin ise 7,2 olduğu saptanmıştır. Alkalin ortamlarda (pH 8 ve pH 9) aktivitesinin zamanla arttığı görülmüştür. Ca2+ varlığında aktivitenin % 60'ından fazlası korunurken Cu2+ varlığında %80'den fazlasını kaybettiği görülmüştür. 1mM EDTA'ya karşı aktivitenin yarısını korurken, 1mM ve 4mM phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF)'e karşı aktivitesini büyük ölçüde kaybetmiştir.;Thermobifida fusca EFTL17, lipase/esterase cloning, lipase/esterase expression.;Thermobifida fusca EFTL17, lipaz/esteraz klonlama, lipaz/esteraz ifade edilmesi.