Rekombinant DNA teknolojisi ile floresan protein üretimi
Küçük Resim Yok
Tarih
2024
Yazarlar
Dergi Başlığı
Dergi ISSN
Cilt Başlığı
Yayıncı
Ege Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü
Erişim Hakkı
info:eu-repo/semantics/openAccess
Özet
Otoindüklenebilir kültür ortamları kullanılarak gerçekleştirilen biyoproses uygulamalarında bir operatör gereksinimi duyulmaması ayrıca sentetik indükleyici uygulamaları ile karşılaştırıldığında da üretim ortamı maliyetinin düşük olması ve sisteme müdahale ihtiyacını azaltması açısından değerlendirildiğinde büyük ölçekli üretim proseslerinde E. coli gibi protein ekspresyonunu lac operonu kontrolünde gerçekleştiren hücreler için sıklıkla tercih edilen kültür ortam koşulunu sağlamaktadır. Bu çalışmada, E. coli'de rekombinant yeşil floresan protein üretimi bir model olarak seçilerek üretimde farklı kültür koşulları değerlendirilmiştir ve en uygun koşul üzerinden maliyeti azaltmaya yönelik bir optimizasyon çalışması yapılmıştır. Sonuçta optimize edilen yeni ortamda 1,18 mg/ml konsantrasyonunda geleneksel IPTG indüklemesi yapılan LB ortamında ise 0,6 mg/ml konsantrasyonunda protein elde edilmiştir. Yapılan optimizasyon çalışması ile birlikte kültür ortamındaki tripton konsantrasyonu % 33,6 oranında azaltılmıştır ve daha düşük maliyetli bir üretim ortam kompozisyonu elde edilmiştir. Optimize edilen yeni üretim ortamı ve kontrol olarak IPTG indüklemesi yapılan LB üretim ortamında 2L karıştırmalı tank biyorektörde gerçekleşen üretimlerde protein konsantrasyonunda LB ortamında %130 optimize edilen yeni ortamda %45,2 artış hesaplanmıştır. Bu bulgular, verimli ve uygun maliyetli büyük ölçekli rekombinant protein üretimi için optimize edilmiş ortamın potansiyelini vurgulamaktadır.
Açıklama
Anahtar Kelimeler
Otoindüksiyon, yeşil floresan protein, E.coli, optimizasyon., Autoinduction, green fluorescent protein, optimization.
