Çeşitli kaynaklardan izole edilen Debaryomyces hansenii strainlerinin moleküler biyolojik tanısı, killer toksin üretimi, saflaştırılması ve biyokontrolde kullanılması
Küçük Resim Yok
Tarih
2013
Yazarlar
Dergi Başlığı
Dergi ISSN
Cilt Başlığı
Yayıncı
Ege Üniversitesi
Erişim Hakkı
info:eu-repo/semantics/closedAccess
Özet
Debaryomyces hansenii, in vivo biocontrol, killer toxin, molecular identification, purification.;Debaryomyces hansenii, in vivo biyokontrol, killer toksin, moleküler identifikasyon, saflaştırma.;İnsanlar, hayvanlar ve bitkilerde patojenite oluşturan çeşitli maya ve küf türlerinin biyolojik kontrolü günümüzde giderek artan bir şekilde ilgi görmektedir. Bu tür biyolojik kontrollerin ortaya çıkarılması, meydana gelebilecek enfeksiyonların önlenmesinin yanı sıra her yıl rapor edilen hasat sonrası kayıpların azaltılmasına olanak sağlamaktadır. Belirli şartlar altında bazı maya strainleri, duyarlı fungus hücrelerinin büyümesine inhibitör etki gösteren proteinler veya glikoproteinler salgılamaktadırlar. Bu maya strainleri, killer mayalar ve salgıladıklara toksinler ise killer toksinler (proteinler) olarak isimlendirilmektedir. Killer toksinlerin biyoteknolojik önemlerinden dolayı araştırmamızda, farklı kaynaklardan izole edilmiş ve fenotipik olarak tanılanmış olan D. hansenii strainlerinin moleküler biyolojik tanılarının gerçekleştirilerek killer toksin üretimlerinin araştırılması ve artırılması, elde edilen killer toksinlerin saflaştırılması ve in vivo biyokontrol deneylerinde kullanılması amaçlanmıştır. Çalışmamızda, fenotipik olarak tanılanmış 56 maya straini, killer toksin üretimi açısından taranmış ve toplam 18 maya straini, bir veya birden fazla test organizmasına karşı toksik aktivite göstermiştir. Toksin aktivitesi gösteren maya türleri, moleküler biyolojik yöntemlerle C. zeylanoides, D. hansenii, M. guilliermondii ve P. kudriavzevii olarak tanılanmıştır. En yüksek toksin aktivitesi gösteren iki D. hansenii straini (TEM 8 ve 17) ile gerçekleştirilen killer toksin artırılması çalışmaları sonrasında en yüksek üretim eldesinin, %6 NaCl ve 1000 ppm DMSO içeren YM broth besiyerinde pH 4.0 ve 20oC'de gerçekleştiği bulunmuştur. Büyük çapta üretim ve iki farklı kromatografi yöntemi ile gerçekleştirilen saflaştırma işlemleri sonrasında saf olarak elde edilen killer proteinlerin 31.5 kDa moleküler ağırlığına sahip olduğu bulunmuştur. Saflaştırılmış killer toksinler, pH 2.5-6.0 ve 5-37oC arasında 1 saat ve proteolitik enzimlere karşı 4 ve 20 saat boyunca yüksek stabilite göstermişlerdir. Gerçekleştirilen in vivo biyokontrol deneyleri sonucunda ise hem maya hücreleri hem de saflaştırılmış killer toksinlerin, meyveler üzerinde bitki patojeni funguslar olan A. brassicicola, A. citri, A. niger ve R. stolonifer türlerine karşı yüksek aktivite gösterdikleri saptanmıştır. Gerçekleştirilen bu çalışma, D. hansenii ve killer proteinlerinin, çok çeşitli küf türüne karşı günümüzde kullanılan sentetik fungisitlere bir alternatif olabileceklerini göstermiştir.
Açıklama
Araştırma Projesi -- Ege Üniversitesi, 2013
