Pleurotus ostreatus atıklarından elde edilen lakkaz enziminin polimerik nanopartiküle immobilizasyonu ve karakterizasyonu
Yükleniyor...
Dosyalar
Tarih
2017
Yazarlar
Dergi Başlığı
Dergi ISSN
Cilt Başlığı
Yayıncı
Ege Üniversitesi
Erişim Hakkı
info:eu-repo/semantics/openAccess
Özet
Lakkazlar (EC 1.10.3.2, p-difenol dioksijen oksidoredüktaz) potansiyel endüstriyel uygulamalarda ilgi çekici özellikleri ile oksidatif enzilerin bir sınıfına aittir. Son zamanlarda değer katan ürün üretimi için atık mantar substratının kullanımı hakkında dikkate değer tartışmalar olmuştur. Bu ürünlerden biri lakkaz gibi lignoselülozik enzim üretimidir. Bu amaçla, bu çalışma biyoremediasyon, hayvan besleme ve enerji hammaddesi gibi ucuz ve hazır enzim kaynağı olarak atık mantar substratının pratik uygulamalarını ve bilimsel araştırma imkanı sağlamaktadır. Aynı zamanda bu çalışma immobilize enzimin depolama, stabilite ve tekrar kullanımlarının serbest lakkazdan daha iyi olduğunu göstermiştir. Bu çalışmada, polimetil glisidil metakrilat- konkanavalin A (p(GMA)-ConA) sürfaktansız emülsiyon polimerizasyon yöntemiyle sentezlenmiştir. p(GMA)-ConA nanopartikülünün spesifik yüzey alanı hesaplanmıştır. Taramalı elektron mikroskopu (SEM) ve FTIR ile karakterize edilmiştir. Kısmi olarak saflaştırılmış Pleurotus ostreatus atıklarından elde edilen lakkaz p(GMA) üzerine kovalent bağlanma, ConA üzerine ise fiziksel bağlanma gerçekleştirmiştir. Bağlanma miktarları belirlenmiştir (Q değeri). p(GMA)-ConA nanopartikül immobilizasyon şartlarını optimize etmek için; pH, sıcaklık, konsantrasyon, zaman, iyon şiddeti deneyleri gerçekleştirilmiştir. İmmobilize edilen lakkazın optimum pH, sıcaklık değerleri belirlenmiştir. SDS-Page ile serbest ve immobilize lakkazın moleküler ağırlıkları belirlenmiştir. Serbest ve immobilize lakkaz depolama stabilite deneyleri 12 hafta boyunca yürütülmüştür. Herbir örneğin aktivitesi, başlangıç aktivitesine kıyasla kalan aktivitenin yüzdeliği olarak ifade edilir. Pleurotus ostreatus atıklarından ekstraselüler lakkaz kısmi olarak saflaştırılmış ve izole edilmiştir. Saflaştırma ultrafiltrasyon sistemi ile gerçekleştirilmiştir. Enzim başlangıç miktarından 7.8 kat saflaştırılmıştır. Saflaştırılmış lakkazın moleküler ağırlığı 52 kDa olarak bulunmuştur. Saflaştırılmış lakkazın optimum pH ve sıcaklığı sırasıyla 4.5 ve 50°C olarak bulunmuştur. Nanopartikülün morfolojik yapısı incelendiğinde küresel morfolojide olduğu ve SEM analizi incelendiğinde 142 nm boyutunda olduğu ve yüzey alanı 708,3 m2 / g olduğu belirlenmiştir. Optimum immobilizasyon pH 8'de, 1 mg/ml konsantrasyonda 0.5 M iyonik şiddette, 25°C'de gerçekleştirilmiştir. Bağlanma miktarı 197,6 mg/g (Q değeri) olarak belirlenmiştir. ABTS substratı kullanılarak immobilize lakkazın optimum değerleri pH 8'de 55°C olarak bulunmuştur.;Lakkaz, enzim immobilizasyonu, p(GMA)-ConA, bağlanma.;Laccase, enzyme immobilization, p(GMA)-ConA, adsorption.
Açıklama
Araştırma projesi -- Ege Üniversitesi, 2017
