Nilotinib ile indüklenmiş KML hücre modeli apoptozunda JAK-STAT yolağı elemanlarından STAT5A ve STAT5B'nin etkilerinin araştırılması
Yükleniyor...
Dosyalar
Tarih
2014
Yazarlar
Dergi Başlığı
Dergi ISSN
Cilt Başlığı
Yayıncı
Ege Üniversitesi
Erişim Hakkı
info:eu-repo/semantics/openAccess
Özet
AMAÇ: Kronik Myeloid Lösemi (KML) multipotent kök hücrelerinin neoplastik transformasyonu sonucunda ortaya çıkan klonal myeloproliferatif hastalıktır. t(9,22) translokasyonu sonucunda oluşan BCR-ABL füzyon geni KML'nin patogenezinde merkezi rol oynamaktadır. BCR-ABL füzyon geni kontrolsüz tirozin kinaz aktivitesi göstermekte ve bazı sinyal yolaklarını uyarmaktadır. JAK-STAT sinyal yolağı KML'nin patogenezinde rol oynayan yolaklardan en önemlisidir. JAK-STAT sinyal yolunda işlev gören STAT proteinleri fosforilasyon ile aktifleşirler. Bu sinyal yolağı, hücre büyümesi, proliferasyonu, farklılaşması, sağkalımı gibi birçok hücre süreçlerini etkiler. JAK-STAT yolağı elemanları STAT5A ve STAT5B; sinyal iletiminde ve malignitede ekspresyonu artan genlerin aktivasyonunda görevli olup, lösemi gelişiminde rol alırlar. STAT gen ekspresyonunun baskılanmasının tümör hücrelerinde apoptoz indüklenmesi ile sonuçlandığı gösterildikten sonra bu alanda çalışmalar hız kazanmıştır. Nilotinib, KML tedavisinde kullanılan tirozin kinaz inhibitörlerinden biridir. Bu çalışmada; nilotinib ile induklenmiş KML hücre modeli apoptozunda JAK-STAT yolağı elemanlarından STAT5A, STAT5B-nin etkilerinin araştırılması ve apoptoz oranlarının belirlenmesi amaçlandı. MATERYAL VE METOD: Nilotinibin sitotoksik efektif dozu IC50 değeri tripan mavisi ve WST-1 hücre proliferasyon analizi testi ile belirlendi. Nilotinib muamelesi sonrasında hücrelerin apoptotik durumu "Cell Death Detection kit" ve "Caspase 3 Activity Assay kit" ile belirlendi. STAT5A ve STAT5B mRNA ekspresyon düzeyleri, nilotinib ile muamele sonrasında eş zamanlı olarak qRT-PCR ile belirlendi. STAT5A ve STAT5B protein düzeylerinin WesternBreeze® Chromogenic Kit-Anti-Rabbit" kit ile değerlendirilmesi yapıldı. İstatistik analizler Student T Test ile (Graph Pad Prism Programı) anlamlılık düzeyi p<0.05 kullanılarak değerlendirilmiştir. BULGULAR: Nilotinib' in IC50 dozu, 48. saat için 34.5 nM olarak belirlenmiştir. Nilotinib muamelesi sonrasında hücrelerin apoptotik durumu "Cell Death Detection kit" ve "Caspase 3 Activity Assay kit" ile belirlendi. Buna göre, IC50 dozunda nilotinib uygulaması sonrasında, kontrol grubuna göre "Cell Death Detection kit" ile 1.89 katlık (52.8% oranında) apoptoz artışı (p=0.0012), "Caspase 3 Activity Assay kit" ile 2.1 katlık apoptoz artışı saptandı (p=0.045). Hedef genlerin mRNAekspresyonlarını kıyasladığımızda, STAT5A ekspresyonu 72. saatte 2.87 kat (%65.12 oranında baskılanmıştır, p= 0.0033 ), 96. saatte 11 kat azalırken (%90.9 oranında baskılanmıştır, p<0.0001), STAT5B ekspresyonu 72. saatte 5.2 kat (% 80.9 oranında baskılanmıştır, p= 0.0032 ), 96.saatte 15 kat azalmıştır(%93.3 oranında baskılanmıştır, p<0.0001). STAT5A protein düzeyleri özellikle 96.saatte, STAT5B protein düzeyleri zamana bağlı olarak 24. saatten itibaren kontrol grubuna göre belirgin olarak baskılandı. Sonuçlar mRNA ekspresyon sonuçları ile uyumlu saptandı. SONUÇ: Çalışmamızda K562 KML hücre dizisinde nilotinibin apoptozisi anlamlı düzeyde indüklediği ve JAK-STAT yolağı üzerinden, STAT5A ve STAT5B ekspresyonlarını baskılayarak bu etkiyi gösterdiği, apoptozda STAT5A, STAT5B'nin önemi gösterildi, bu da KML ve JAK-STAT mekanizması ile gerçekleşen bir çok malignitelerin tedavisinin hedefi olarak, STAT5A ve STAT5B'ni hedef alan tedavi yöntemlerinin üzerinde çalışmalar yapılması gerektiğini düşündürmektedir.
Açıklama
Anahtar Kelimeler
STAT5A, STAT5B, Nilotinib, KML, Apoptoz., STAT5A, STAT5B, Nilotinib, CML, Apoptosis., İç Hastalıkları A.B.D.
