Astragalus trojanus Stev. hücre süspansiyon kültürlerinde sekonder metabolit içeriklerinin arttırılması
Yükleniyor...
Dosyalar
Tarih
2013
Yazarlar
Dergi Başlığı
Dergi ISSN
Cilt Başlığı
Yayıncı
Ege Üniversitesi
Erişim Hakkı
info:eu-repo/semantics/openAccess
Özet
Astragalus trojanus Stev., özellikle sikloartan-tip metabolitler başta olmak üzere çok değerli sekonder metabolitlere sahip tıbbi bir bitkidir. Bu projede A. trojanus'a ait tohumlar in vitro koşullarda çimlendirilmiştir ve 27 klon arasından en yüksek rejenerasyon kapasitesine sahip 3 tanesi (klon 1, 12 ve 15) seçilerek çalışmalara devam edilmiştir. Bu üç klona ait gövde ve yaprak eksplantları farklı büyüme düzenleyicilerine, çevre koşullarına ve besin ortamı bileşimlerine maruz bırakılarak kallus oluşturma kapasiteleri belirlenmiştir. Bu eksplantlar farklı konsantrasyonlarda kinetin, naftalen asetik asit, 2,4-diklorofenoksiasetik asit, thidiazuron ve indolasetik asit içeren Murashige ve Skoog (MS) ve Woody Plant (WPM) besin ortamlarında, iki farklı ışık yoğunluğu (1000 ve 4000 lux) ve karanlık koşullar altında kültüre alınmışlardır. Hem MS hem de WPM besin ortamlarının kallus oluşumunu tetiklediği görülmüştür. Gövde ve yaprak eksplantlarında kallus rejenerasyonları görülmesine rağmen, gövde eksplantlarında yaprak eksplantlarına göre daha yüksek miktarlarda kallus rejenere olmuştur. 4 ve 8 mg/L 2,4-D içeren WPM besin ortamlarında %100 kallus oluşumu tespit edilmiştir. 100 μg/L selenyum ve iki kat WPM vitaminlerinin eklenmesiyle karanlık koşullarda kallus biyokütlesinin (78 mg) arttığı görülmüş ve bu besin ortamı hücre süspansiyon kültürlerinin kurulması için de kullanılmıştır. Hücre süspansiyon kültürlerinde sekonder metabolit üretiminin teşvik edilmesi için elisitörler (metil jasmonat, jasmonik asit, salisilik asit ve pektin) ve prekürsör (ß-sitosterol) uygulaması yapılmıştır. Mikroçoğaltım yapılan dokuların, kallusların ve süspanse hücrelerin astragalozit-IV ve sikloastragenol üretim kabiliyetleri belirlenmiştir. Mikroçoğaltımı yapılan dokularda en yüksek astragalozit-IV (0.5486 μg/mg) ve sikloastragenol (0.1263 μg/mg) içeriği 1. klonun in vitro'da gelişen köklerinde belirlenmiştir. Kallus dokusunda en yüksek astragalozit-IV (3.5 μg/mg) ve sikloastragenol (4.8 μg/mg) içeriği gövdeden gelişen kalluslarda tespit edilmiştir. Süspanse hücrelerde, 50 mM metil jasmonat ile elisite edilmiş kültürlerin (3.57 g/L yaş ağırlık) 14. gününde en yüksek astragalozit-IV içeriği 0.9435 μg/mg olarak belirlenirken, en yüksek sikloastragenol içeriği 50 mM jasmonik asit eklenen kültürlerin (0.82 g/L yaş ağırlık) 28. gününde 0.3626 μg/mg olarak saptanmıştır. Süspanse hücrelerin büyük ölçekli üretimi için iki farklı kesikli kültürle (500 mL'lik erlende 200 mL ve 1000 mL'lik erlende 400 mL) çalışıldığında, en yüksek astragalozit-IV miktarı 0.3759 μg/mg olarak 500 mL ölçeğinde elde edilmiştir.
Açıklama
Anahtar Kelimeler
Astragalus trojanus, astragalozit-IV, sikloastragenol, klonal çoğaltım, kaluus, hücre süspansiyon kültürü, elisitör, prekürsör., Astragalus trojanus, astragaloside-IV, cycloastragenol, clonal propagation, callus, cell suspension culture, alicitor, precursor., Biyomühendislik A.B.D.
