D-Alloz tayini için genetik olarak kodlanmış Biyoluminesans Rezonans enerji Transferi (BRET) temelli biyosensör tasarlanması

D-Allose, periplasmic ligand binding protein, bioluminescence resonance energy transfer (BRET), biosensor.;D-Alloz doğada nadir olarak bulunan bir şekerdir ve metabolik etkileri nedeniyle son birkaç yıldır ilgi çekmektedir. Antitümör, antienflamatuvar, antihipertansif, immün baskılayıcı ve antioksidan aktiviteleri de dahil olmak üzere pek çok farmasötik etkisi olduğu gösterilmiştir. D-allozun in vitro tayini için enzimatik reaksiyonlara dayanan iki yöntem geliştirilmiştir. Ancak terapötik etkinliğinin ve hücre içindeki lokalizasyonunun gerçek zamanlı olarak belirlenmesi için, in vivo tayine imkan veren sistemlerin geliştirilmesi gerekir. FRET veya BRET temelli genetik kodlanmış sensör sistemleri in vivo tayinlerde kullanılan önemli araçlardır. BRET sisteminde, donör (lusiferaz) ve akseptör (floresans protein) proteinler arasına, hedef metaboliti tanıyan bir protein (örneğin periplazmik ligand bağlayıcı protein) klonlanabilir. Metabolitin tanıyıcı proteine spesifik olarak bağlanması sonucu meydana gelen konformasyon değişimi, donör ve akseptör proteinleri birbirine yaklaştırır. Bu sayede enerji donörden akseptöre transfer edilir ve uyarılan floresans protein, belli bir dalga boyunda emisyon gösterir. Bu sinyal yoluyla dedeksiyon mümkün olur. Proje kapsamında, genetik olarak kodlanmış biyoluminesans rezonans enerji transferi (BRET) temelli biyosensör sistemi geliştirilmesi ve bu biyosensörün D-allozun in vitro tayini için optimizasyonu hedeflendi. E.coli D-alloz bağlayan proteinin N- ve C- terminaline lusiferaz ile floresans protein yerleştirildi. Dört farklı BRET sistemi tasarlandı ve özellikleri karşılaştırıldı. Renilla lusiferazın (Rluc), alloz bağlayıcı proteinin (ABP) N-terminalinde ve sarı floresans proteinin (YFP) C-terminalinde konumlandırıldığı biyosensör protein kullanılarak 0.1-10 nM aralığında kantitatif D-alloz tayini gerçekleştirilebileceği ve bu aralıkta D-riboz ile D-glukozun biyoluminesans sinyali üzerinde girişim yapmadığı sonuçlarına ulaşıldı.;D-Alloz, periplazmik ligand bağlayıcı protein, biyoluminesans rezonans enerji transferi (BRET), biyosensör.