5-alfa redüktaz enzimi nakavtına yönelik CRISPR/Cas9 enzim immobilizasyonu sağlayan lipozom formülasyonlarının geliştirilmesi ve etkinliğinin değerlendirilmesi
Yükleniyor...
Dosyalar
Tarih
2022
Yazarlar
Dergi Başlığı
Dergi ISSN
Cilt Başlığı
Yayıncı
Ege Üniversitesi
Erişim Hakkı
info:eu-repo/semantics/openAccess
Özet
Gerçekleştirilen projede yenilikçi bir gen düzenleme aracı olan CRISPR teknolojisi kullanılarak prostat kanserine ve/veya prostat hiperplazisi tedavisine yönelik 5-alfa redüktaz enzim nakavtı amaçlanmıştır. Bu kapsamda CRISPR-ilişkili nükleaz-9 (Cas9) enziminin immobilizasyonu ve 5-alfa reduktaz enzim nakavtına yönelik kılavuz RNA (sgRNA) ile hücre içi integrasyonu sağlayabilen taşıyıcı bir sistem geliştirilmiştir. Mevcut uygulanan CRISPR temelli yaklaşımlardan farklı olarak Cas9 enzimini enkapsüle edebilen ve dış yüzeyinde sgRNA'lar ile kompleks oluşturabilen lipozom temelli bir taşıyıcı sistem yaklaşımı ilk kez bu projede uygulanmıştır. Geliştirilen lipozomların karakterizasyon çalışmaları kapsamında dinamik ışık saçılımı (DLS) yöntemi ile partikül boyutu, zeta potasiyeli ve polidispersite indeksi değerlerinin ölçülmesi; agaroz jel elektroforezinde SDS salım ve serum stabilitelerinin belirlenmesi; taramalı elektron mikroskopisi ile partikül morfolojisinin belirlenmesi; lipozomların enkapsülasyon oranlarının ve Cas9 enzimi salım profillerinin belirlenmesi; son olarak da partiküllerin stabilitesinin 3 ay süreyle takibi gerçekleştirilmiştir. Karakterizasyon çalışmaları sonrasında lipozomların sitotoksisite çalışmaları ile güvenli uygulama dozları belirlenmiş ve transfeksiyon etkinliğinin kalitatif ve kantitatif analizi gerçekleştirilmiştir. Son olarak geliştirilen sistemin 5-alfa redüktaz enzimi gen nakavtı derecesi mRNA düzeyinde belirlenmiştir. Prostat hücre hatlarında yapılacak bu çalışma ile prostat hiperplazisi, prostat kanseri, androjenik allopesi ve steroid metabolizmasındaki önemli rollere sahip 5 alfa redüktaz enzimine yönelik mevcut inhibitörlere alternatif olabilecek kalıcı gen düzenlemesi yapabilen bir tedavi yaklaşımı ortaya konmuştur. Geliştirilmek istenen bu konsept ile tekrar doz uygulaması gerektirmeyen ve yan etkileri düşük bir tedavi arayışı çalışmalarına yenilikçi bir çözüm önerisi sunulmaktadır.;CRISPR-Cas9, 5-alfa redüktaz, enzim immobilizasyonu, gen nakavtı, prostat.;CRISPR-Cas9, 5-alpha reductase, enzyme immobilization, gene knock-out, prostate.
Açıklama
Eczacılık Fakültesi, Farmasötik Biyoteknoloji A.B.D. Araştırma Projesi
Araştırma Projesi elektronik ortamda bulunmaktadır.
Araştırma Projesi elektronik ortamda bulunmaktadır.
