Tek hücrede real time PCR ile beta talasemi mutasyonlarının tanımlanması

Ülkemizde beta talasemi mutasyonu tasıyan yaklasık 1,5 milyon kisi bulunmaktadır. Tasıyıcı ve hasta bireylerin hasta çocuga sahip olmamaları için bir seçenek preimplantasyon genetik tanı (PGT) dır. PGT, embriyoların anne rahmine yerlestirilmeden önce genetik tanısı yapılarak saglıklı embriyoların seçilmesi islemidir. Blastomer ile çalısmadan önce diger tek hücre kaynakları ile protokol test edilmelidir. Bu çalısmada, beta talasemi mutasyonu heterozigot olarak belirlenmis 9 bireyden ve bilesik heterozigot olarak belirlenmis 1 bireyden elde edilen periferik kandan, mikromanipülasyonla tek lenfositler elde edilmis ve bu kisilerin anne, babaları ve 2 ailede 2 homozigot hasta bireyle beraber genotiplendirilmistir. Beta globin gen bölgesi ile 3 adet gen içi ve 2 adet gen dısı polimorfik markırların multipleks PCR’ı uygulanmıstır. Bu markırlar, öncesinde 100 kisiden olusan Türk populasyonu üzerinde incelenerek heterozigotluk oranları hesaplanmıstır. kinci PCR, nested PCR olarak dizayn edilmis olup, her mutasyona özgün farklı sentez ettirilmis olan Light Cycler probları kullanılmıstır. Ayrıca ilk PCR’dan elde edilen ürünler sekans cihazında incelenerek kontaminasyon ve allel dropout incelenmistir. D11S4891, D13S314, GABRB ve D11S2362 markırları için heterozigotluk oranları %74’ün üzerinde bulundu. Seçilen 10 birey için uygulanan tek hücre PCR’ında tüm hibridizasyon probları denendi; %98 amplifikasyon basarısı ve %1 ADO saptandı. Kontaminasyon gözlenmedi. Çalısmaya alınan tüm bireylerin genotiplendirmesi basarıyla yapıldı. Bu çalısmayla elde edilen bilgi ve deneyimler, ileriki dönem tek hücre çalısmalarına ısık tutacaktır.