Üçüncü nesil tirozin kinaz inhibitörü Ponatinib'e duyarlı ve dirençli KML hücrelerine STAT5 inhibitörü pimozid uygulamasının lösemik hücre yanıtı üzerine etkilerinin araştırılması
Yükleniyor...
Dosyalar
Tarih
2019
Yazarlar
Dergi Başlığı
Dergi ISSN
Cilt Başlığı
Yayıncı
Ege Üniversitesi
Erişim Hakkı
info:eu-repo/semantics/openAccess
Özet
Hematopoietik kök hücrenin klonal bir miyeloproliferatif bozukluğu olan kronik miyeloid lösemi (KML), t(9; 22) resiprokal translokasyonu sonucunda oluşan BCR/ABL onkogeni ile karakterizedir. Bu onkogen sürekli tirozin kinaz aktivitesine neden olur ve KML lökomogenezinden sorumludur. Tirozin kinaz inhibitörü (TKI) İmatinib, KML tedavisinde yeni bir çığır açmıştır. Fakat, KML olgularının zamanla İmatinibe karşı direnç geliştirdiği gözlenmiştir. Bu nedenle II. nesil (Dasatinib, Nilotinib, Bosutinib) ve III. nesil TKI'leri (Ponatinib) geliştirilmiştir. Kazanılmış İmatinib direnci; Dasatinib, Nilotinib, Bosutinib ve Ponatinib için de azalmış etkinlik ve artmış direnç ile ilişkilendirilmiştir. JAK/STAT yolağında bulunan STAT proteinleri, birer transkripsiyon faktörüdür ve lösemi gelişiminde önemli rol oynamaktadırlar. Özellikle aktif STAT5, lösemik hücrelerin sağ kalımını ve proliferasyonunu sağlayan temel proteinlerdendir. Lösemide artan STAT5 gen ekspresyonunun baskılanmasıyla lösemik hücre apoptozunun indüklenmesinin ve TKI tedavisine karşı gelişebilecek direncin üstesinden gelinmesinde anahtar bir role sahip olduğunun gösterilmesi; STAT' ları, KML' ye karşı geliştirilen yeni anti-kanser ilaçların, birinci hedefi haline gelmiştir. Çalışmamızda, FDA onaylı psikotropik ilaç olan "Pimozide" etken maddesinin aynı zamanda STAT5 inhibitörü olmasından yola çıkarak, STAT5 protein fosforilasyonunun inhibe edilmesiyle KML hücrelerinin proliferasyonu, apoptozu, hücre döngü aresti, çeşitli biyolojik fonsiyonları bulunan genlerin mRNA seviyesindeki ekspresyonları ve STAT5' lerin protein ekspresyonu gibi hücresel yanıtlar üzerindeki etkisi araştırılmıştır. Bu amaçla, KML hücre hattı modeli atasal K562 ve onun 1 nM Ponatinib' e direnç kazandırılmış K562/Pon1 dirençli hücrelerinde moleküler düzeyde analizler gerçekleştirilmiştir. Ayrıca, Ponatinib + Pimozide kombinasyon deneyleri de tez kapsamında araştırılmış, hücresel yanıt analizleri bu deney grupları için de gerçekleştirilmiştir. Bu çalışmada kullanılan lösemi hücre hatlarında Pimozide etken maddesinin sitotoksik etkisi WST-1 analizi kullanılarak zaman ve doza bağımlı olarak değerlendirilmiştir. Hücrelere uygulanan Pimozide, Ponatinib dozlarının ve kombinasyon dozlarının hücreler üzerinde oluşturduğu apoptotik etki Annexin V yöntemine göre değerlendirilirken, hücre döngüsü üzerindeki etki "BD Cycletest Plus DNA Reagent Kit" ile değerlendirilmiştir. Doz uygulamalarının hücreler üzerinde oluşturduğu gen ekspresyon değişimleri, tüm doz grupları ve kontrol gruplarından elde edilen mRNA'larla RT-qPCR ile belirlenmiştir. Son olarak proteinlerin kantitatif tayinleri için western blot yöntemi kullanılmıştır. Pimozide etken maddesinin 72. saat IC50 dozu K562 hücreleri için 5, 06 ?M belirlenirken, K562/Pon1 hücreleri için 8, 72 ?M olarak belirlenmiştir. Gen ekspresyon ve western blot çalışmalarımızın ortak sonucu olarak Pimozidenin STAT5 inhibitörü olduğu ve hem STAT5A hem de STAT5B genlerini inhibe ettiği belirlenmiştir. Ayrıca STAT3, JAK2, SOCS1 gibi JAK/STAT yolağında çeşitli görevlere sahip olan proteinlerinin ekspresyonu değiştirmesi, bu yolağı etkilebilecek önemli bir ajan olduğunu düşünmekteyiz. Pimozide etken maddesinin hücreler üzerinde apoptotik etkiye sahip olduğunu ve hücre döngüsünde G0-G1 arrestine neden olduğu tespit edilmiştir. Pimozidenin K562 hücrelerindense K562/Pon1 hücrelerinde daha effektif olduğu belirlenmiştir. Bu sayede, KML' de gelişmiş olan ilaç direncini kırmada kullanılabilecek effektif bir ajan olabileceğini düşünmekteyiz. Ayrıca K562/Pon1 hücrelerinde ponatinible kombine olarak kullanıldığında; Ponatinib ilacının DRI 3, 49 olarak belirlenmiştir. Kullanılan Ponatinib dozunun azaltılabilecek olmasından dolayı normal hücrelerin üzerinde oluşan sitotoksitenin azaltacağı düşünülmektedir.;KML; Pimozide; STAT5.;CML; Pimozide; STAT5.
Açıklama
Tıp Fakültesi, Tıbbi Biyoloji A.B.D. Araştırma Projesi
Araştırma Projesi elektronik ortamda bulunmaktadır.
Araştırma Projesi elektronik ortamda bulunmaktadır.
