Preparation of ascorbate oxidase enzyme electrode and its usage for L-ascorbic acid determination

Basit Öğe Kaydı
dc.contributor.advisorDinçkaya, Erhan
dc.contributor.authorAkyılmaz, Erol
dc.date.accessioned2024-08-19T19:40:20Z
dc.date.available2024-08-19T19:40:20Z
dc.date.issued1996
dc.departmentEge Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Kimya Ana Bilim Dalıen_US
dc.description.abstractBu tezde, salatalıktan (Cucumis sativus L.) izole edilip kısmi olarak saflaştınlan Askorbat oksidaz [(L-Askorbat: oksijen oksidoredüktaz) (EC 1.10.3.3)] glutaraldehid yardımıyla jelatin ile çapraz bağlanarak, çözünmüş oksijen probu membranı üzerinde bir biyoaktif tabaka oluşturuldu ve L-askorbik aside duyarlı bir askorbat oksidaz enzim eiektrodu geliştirildi. Ölçümler enzimatik reaksiyon uyarınca L-askorbik asit konsantrasyonu ile orantılı olarak tüketilen oksijen düzeyinin belirlenmesi yoluyla çizilen standard grafikler yardımıyla gerçekleştirildi. Hazırlanan biyosensörün optimizasyon çalışmalarında en uygun askorbat oksidaz, jelatin ve glutaraldehid oranlan sırasıyla 24,8 U/cm^, 5,9 mgjelatin/cm^ ve %2,5 olarak bulundu. Optimum çalışma ortamı olarak 50 mM'lik pH:7,5 olan fosfat tamponunun kullanılması ve ölçümlerin 35°C de yapılması gerektiği sonucuna varıldı. Geliştirilen biyosensörün karakterizasyonu amacıyla yapılan çalışmalar sonucunda 5,0xl0~5 - 1,2x10" 3 M L-askorbik asit konsantrasyon aralığında doğrusal sonuçların alınabildiği tespit edildi. Tekrarlanabilirlik denemelerinde (n=ll), 4,0xl0"4 MTlık L-askorbik asit konsantrasyonu için ortalama değer (x)=3,99xl0"4 M, standard sapma (S.S):±0,001 ve varyasyon katsayısı (V.K):%0,251 olarak bulundu. Ayrıca substrat spesifikliği, depo kararlılığı ve bazı maddelerin girişim etkileri araştırıldı. Son olarak bazı meyva ekstraktları ve vitamin tabletlerinde, geliştirilen biyosensörle L-askorbik asit tayini yapıldı ve elde edilen sonuçlar ve metodun duyarlılığı 2,6 diklorofenolindofenol metodu ile kıyaslandı. Anahtar ' Kelimeler : Askorbat Oksidaz, L-Askorbik Asit, Enzim Elektrodlan, Biosensörleren_US
dc.description.abstractIn this thesis, ascorbate oxidase [(L-Ascorbate:oxygen oxidoreductase) (EC1. 10.3.3)], isolated and partially purified from cucumber (Cucumis sativus L.) was crosslinked with gelatine by using glutaraldehyde and a bioactive layer was formed on the dissolved oxygen probe, therefore, ascorbate oxidase enzyme electrode which was sensitive for L-ascorbic acid determination was developed. Measurements were carried out by standard curves which were obtained by the determination of consumed oxygen level, related to L-ascorbic acid concentration in the enzymatic reaction. In the optimization studies of the biosensor prepared, the most suitable ascorbate oxidase, gelatine and glutaraldehyde ratios were determined as 24.8 U/cm-, 5.9 mggelatine/cm^ and, 2.5% respectively. The phosphate buffer (50 mM, pH:7.5) and 35° C were established as providing the optimum conditions. The characterization studies proved a linearity in the ascorbic acid concentration range 5.0xl0~5-1.2xl0~3 M. The reproducibility experiments (n=ll) revealed that for 4x10-4 M L-ascorbic acid, the average value (x) was 3.99x10-4 M,standard deviation (S.D) was ±0.001 and, variation coefficient (C.V) was 0.251%. Moreover, substrate specification, storage stability and the interference effects of some substances were investigated. Finally, L-ascorbic acid determination in some fruit extracts and vitamin tablets was carried out. Both the results obtained and the sensitivity of the method were compared with the 2,6 dichlorophenolindophenol method. Keywords: Ascorbate Oxidase, L- Ascorbic Acid, Enzyme Electrodes, Biosensorsen_US
dc.identifier.endpage54en_US
dc.identifier.startpage1en_US
dc.identifier.urihttps://tez.yok.gov.tr/UlusalTezMerkezi/TezGoster?key=MzP7PYssFqdb3WIjlroAkRsCJt26BbNdfpEUKRMf_8YmGhXS3M7r0g4hG9WZ8FJl
dc.identifier.urihttps://hdl.handle.net/11454/85562
dc.identifier.yoktezid50707en_US
dc.language.isoenen_US
dc.publisherEge Üniversitesien_US
dc.relation.publicationcategoryTezen_US
dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/openAccessen_US
dc.subjectBiyomühendisliken_US
dc.subjectBioengineeringen_US
dc.subjectAskorbik asiten_US
dc.subjectAscorbic aciden_US
dc.subjectEnzimleren_US
dc.subjectEnzymesen_US
dc.titlePreparation of ascorbate oxidase enzyme electrode and its usage for L-ascorbic acid determinationen_US
dc.title.alternativeAskorbat oks1daz enz1m elektrodu hazırlanması ve l-askorb1kas1t tayininde kullanılmasıen_US
dc.typeMaster Thesisen_US

Dosyalar

Koleksiyon

Fen Bilimleri Enstitüsü Tez Koleksiyonu