Böbrek hücre kültürlerinde kalsiyum oksalat kristallerinin agregasyonunun araştırılması

Basit Öğe Kaydı
dc.contributor.authorLevi, Çiğdem Özbaşlı
dc.date.accessioned2024-08-19T19:45:19Z
dc.date.available2024-08-19T19:45:19Z
dc.date.issued1999
dc.departmentEge Üniversitesi, Tıp Fakültesi, İç Hastalıkları Ana Bilim Dalıen_US
dc.descriptionBu tezin, veri tabanı üzerinden yayınlanma izni bulunmamaktadır. Yayınlanma izni olmayan tezlerin basılı kopyalarına Üniversite kütüphaneniz aracılığıyla (TÜBESS üzerinden) erişebilirsiniz.en_US
dc.description.abstractÖZET Böbrek taşlan oldukça sık rastlanan ve önemli morbidite taşıyan bir sağlık sorunudur. En sık rastlanan böbrek taşı kalsiyum oksalat taşlandır. Taş oluşumu kalsiyum ve oksalat süpersaturasyonunun bulunduğu tübül sıvısında kristal nükleasyonu ile başlar. Ancak taş oluşumunun bundan sonraki safhaları net olarak bilinmemektedir. Tübül segmentlerindeki süpersatürasyonlar ve in vitro deneylerde kalsiyum oksalat kristallerinin maksimum büyüme hızı hesaplandığında bir kristalin tübüllerde takılacak kadar büyüyemeden idrarla taşınıp atılacağı sonucuna varılmaktadır(33). Agregasyon kristallerin tübülde tutunma ihtimalini belirgin şekilde arttınr, çünkü relatif olarak kısa bir zamanda büyük bir partikül oluşturabilir(38). Normal idrar agregasyonu inhibe eden faktörler içerdiği halde taş oluşumu görülen kişilerin idrarında bu inhibisyon daha zayıftır(30) ve agregasyon defektinin düzeyi taş oluşumu sıklığı doğru orantılıdır(41). Tüm bu nedenlerle agregasyon böbrek taşı oluşumunda önemli bir mekanizma olarak ortaya çıkmaktadır. Bu çalışmada MDCK(Madin-Darby Canine Kidney Cells) hücre kültürlerinde saptanan kristal agrege edici aktivitenin incelenmesi ve saflaştınlması amaçlanmıştır. Yapılan deneylerde tek katmanlı MDCK hücre kültürlerinin yüksek miktarda kristal agrege edici aktivite taşıdığı ve kristal agrege edici faktör (KAF) adı verilen bu maddenin disülfit bağlan içeren kuvvetli derecede anyonik bir protein yapısında olduğunu görüldü. KAF'ün hücrelerin apikal yüzünden salındığı saptandı. KAF'ün değişik kristaller üzerinde etkisi incelendiğinde, kalsiyum içeren kristaller olan kalsiyum oksalat, hidroksiapatit ve bruşit agrege olurken ürik asit ve Na-H ürat kristalleri etkilenmedi. KAF'ün saflaştınlması için kolon kromatografisi ile aynlan aktif fraksiyonlar toplanarak konsantre edildi. Bu materyal SDS-PAGE elektroforezi ile analiz edildi. İndirgemeyen koşullarda yaklaşık 670 kDa ağırlığında tek bir bant, indirgeyen koşullarda disülfit bağlarının kınlması ile ise molekül ağırlıklan 35 ila 150 kDa arasında değişen altı ayn bant saptandı. Jelden elusyon yapılarak bu bantlann her birinde kristal agrege edici aktivite arandı. Kristal agrege edici aktivite sadece indirgemeyen koşullarda elde edilen 670 kDa bantta, yani intakt 32faktörde bulundu. Yapılan amino asit analizinde büyük miktarda asparagin/aspartik asit (%. 12.4) ve glutamine/glutamik asit(% 17.3) rezidüleri içerdiği görüldü. Bu faktörün taşıdığı yüksek negatif yükü açıklar. Karbohidrat miktarı % 6.3 olarak saptandı. Amino asit dizilim analizine tabi tutulan 670 kDa bandın ilk altı amino asiti belirlendi. Ayrıca 150 kDa ve 85 kDa bantlar da analiz edildi. 670 kDa proteinin ve indirgeme sonrası ortaya çıkan 150 kDa parçasının N-terminal amino asit dizilimi alfa 2- makroglobuline kuvvetli bir benzerlik gösterdi. 150 kDa bandın lisin-C parçalaması ile elde edilen fragmanları da alfa 2-makroglobulinin amino asit dizilimi ile benzerlik taşıyordu. 85 kDa ağırlığındaki bandın lisin-C ile parçalanma sonrası analizinde Ig u zinciri ile kuvvetli bir benzerlik saptandı. Ticari alfa 2-makroglobuIin ve IgM tek tek veya birarada değişen konsantrasyonlarda kristal agregasyonuna neden olmadı. Bu bulguların ışığında, kristal agrege edici faktörün MDCK hücre kültür sıvısında oluşan ve başlıca komponentleri alfa 2-makroglobulin ve Ig m zincirini olan bir protein kompleksi olduğu sonucuna varıldı. Alfa 2-makroglobulinin muhtemelen MDCK hücreleri tarafından salman bir protein ile aktive olarak şekil değiştirdiği ve kompleksin temelini oluşturduğu düşünülmektedir. Distal tübül / toplayıcı kanal hücrelerini temsil eden MDCK kültürlerinin böyle kristal agregan aktivite taşıması böbrek taşlarının oluşumu patogenezinde önemli olabilir. 33en_US
dc.identifier.endpage38en_US
dc.identifier.startpage1en_US
dc.identifier.urihttps://hdl.handle.net/11454/86831
dc.identifier.yoktezid88871en_US
dc.language.isotren_US
dc.publisherEge Üniversitesien_US
dc.relation.publicationcategoryTezen_US
dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/closedAccessen_US
dc.subjectNefrolojien_US
dc.subjectNephrologyen_US
dc.subjectBöbrek taşlarıen_US
dc.subjectKidney calculien_US
dc.subjectHücre kültür tekniklerien_US
dc.subjectCell culture techniquesen_US
dc.subjectKalsiyum oksalaten_US
dc.subjectCalcium oxalateen_US
dc.subjectSistematik sapma-epidemiyolojien_US
dc.subjectBias-epidemiologyen_US
dc.titleBöbrek hücre kültürlerinde kalsiyum oksalat kristallerinin agregasyonunun araştırılmasıen_US
dc.typeSpecialist Thesisen_US

Dosyalar

Koleksiyon

Tıp Fakültesi Uzmanlık Tezleri Koleksiyonu