Süt ve süt ürünlerinden Yarrowia Lipolytica izolasyonu, identifikasyonu ve ürettikleri alkalin proteaz ribonükleaz enzimlerinin aktivitelerinin araştırılması

Farklı süt ve süt ürünlerinde bozulmaya neden olan 48 maya izole edilmis ve bu izolatların tanılanmaları hem Barnett ve ark. (2000) tarafından önerilen fenotipik testler ile hem de 5,8S ITS PCR ile genotipik testlerle tanılanmıstırlar. Ayrıca, ITS PCR’da elde edilen PCR fragmentlerinin sekans analizi yapılmıstır. Fenotipik testler sonucunda, 48 izolatın sadece 9 tanesi (5, 6, 9, 10, 17, 18, 19, 20 ve 21 numaralı strainler) Y. lipolytica straini olarak tanılanmıs olmasına rağmen denemeye alınan 43 izolatın genotipik tanılamasında bu 9 Y. lipolytica straine ilave olarak 5 tane daha izolat (1, 3, 7, 8 ve 23 numaralı strainler) Y. lipolytica straini olarak tanılanmıstır. Ancak, sekans analizi sonuçlarında, 14 Y. lipolytica straininden bir tanesi (1 numaralı strain) Saccharomyces cerevisiae olarak tanılanmıstır. Yapılan sekans analizi sonucunda, ITS PCR’a göre tanılanan 1, 8, 9 ve 10 numaralı Y. lipolytica strainleri haricinde 3, 5, 6, 7, 17, 18, 19, 20, 21 ve 23 numaralı Y. lipolytica strainleri sırasıyla %89, %99, %92, %93, %96, %93, %89, %92, %92 ve %92 oranında Y. lipolytica strainleri ile benzerlik göstermistir. Y. lipolytica tarafından üretilen alkalin proteaz ve ribonükleaz hücre dısına salgılanan ve endüstriyel önemi olan enzimlerdir. Arastırmamızda identifikasyonu yapılan 14 Y. lipolytica strainleri farklı karbon ve azot kaynakları kullanılarak alkalin ekstraselüler proteaz (AEP) ve ribonükleaz (RNaz) üretiminin regülasyonu yönünden çalısılmıs ve farklı pH değerlerinindeki sıvı kültürler kullanılarak süpernant ortamın enzim aktivitesinin saptanması amaçlanmıstır. Bütün ortamlarda en fazla aktivite nötr pH’da meydana gelmistir. AEP’i en fazla nötr pH’da üreten strainin Yarrowia lipolytica CBS 6124 tip türünün olduğu ve 57 unit/ml aktiviteye sahip olduğu hesaplanmıstır. Bunu 5 numaralı Y. lipolytica straini 36,21 unit/ml ile takip etmistir. Benzer sekilde, denemeler sonunda RNaz üretimi en fazla aktivite nötr pH’da meydana gelmistir. RNazı en fazla üreten strainin 21 numaralı Y. lipolytica straininin olduğu ve 3002,48 unit/ml aktiviteye sahip olduğu hesaplanmıstır.