Mesane kanserinde sitokeratin 20 mRNA ekspresyonunun real-time revers transkriptaz zincir reaksiyonu ile kantitatif tayini

Bladder cancer, CK20, Realtime Online PCR.;Mesane kanseri, CK20, Realtime Online PCR.;Sistoskopi, mesane tümörlerinin tanısında ve nükslerin rutin takibinde yaygın olarak kullanılan invaziv bir yöntemdir. Bundan dolayı araştırıcılar mesane kanseri için invaziv olmayan, hızlı sonuç veren, ucuz, kişi bağımsız, yüksek duyarlılık ve özgüllüğe sahip olan tümör belirleyicilerini araştırmaya yönlenmiştir. Araştırma aşamasında olan tümör belirleyicileri arasında sitokeratinler yer almaktadır. Sitokeratinler epitel hücrelerinin intermediate flamentlerden meydana gelen ve 20 polipeptitten oluşan multigen proteinlerdir. Transizyonel hücreli karsinomlarda (THK), sitokeratinlerin (CK) ekspresyonlarındaki değişikliklerin, potansiyel tanı ve önceden teşhiste önemli olduğu düşünülmektedir. Yüksek düzeydeki displazilerde, CK20 ekspresyonunun disregülasyonu, üroteliyal tümör gelişiminin erken evrelerinde gözlenen bir olay olarak karşımıza çıkmaktadır. Kantitatif olarak ifade edilebilen CK20 ekspresyon düzeyindeki fark, mesane kanserinin erken evrelerde tespit edilebilmesi açısından önem taşımaktadır. Biz çalışmamızda CK20 ekpresyonunun tümör oluşumu veya rekürrensinde ne kadar güvenilir olduğu hipotezinden yola çıkarak normal ve tümöral üreteliyal hücreler arasındaki ekspresyonun kantifikasyon farkını araştırmayı hedefledik. Çalışmamızda Üroloji Ana Bilim Dalında THK öntanısı (6) ve tanısı (34) almış 40 olgu ve herhangi bir hastalığı bulunmadığı düşünülen 10 sağlıklı birey kontrol grubu olarak çalışmaya alındı. Olgulardan alınan sabah idrar örneklerinden gerçekleştirilen total RNA izolasyonunu takiben cDNA sentez edildi. Daha sonra CK20 Kantifikasyon Kiti ile CK20 mRNA? nın amplifikasyonu ve kantitasyonu gerçekleştirildi. Çalışma grubumuzdaki 34 THK? lu olgunun grade ve evreleri; 1 olguda G1/Ta, 1 olguda G2/Ta, 18 olguda G2/T1, 1 olguda G2/T2, 3 olguda G3/T1, 8 olguda G3/T2, 1 olguda G3/T3 ve 1 olguda da G3/T4? tür. Olgu grubumuzun idrar örneklerindeki CK20 mRNA ekspresyonunun rölatif oranları belirlenmiştir. Çalışılan 40 olgunun CK20 mRNA ekspresyon rölatif oranının ortalaması 11,12±47,53, median 0,50, minimum 0 ve maksimum 305,41 olarak saptanmıştır. Mesane kanseri ön tanılı 6 olgunun CK20 mRNA expresyonunun rölatif oranının ortalaması 0,06±0,12 olarak saptanmıştır. Yapılan klinik incelemeler sonucu, bu olgular mesane kanseri tanısı almamıştır. THK öntanılı 6 olgu hariç tutulup, geri kalan 34 THK? lu olguda CK20 mRNA ekspresyon rölatif oranının ortalaması 11,91±50,01, median 0,50, minimum 0,005 ve maksimum 305,41 olarak saptanmıştır. Çalışılan 10 olgunun CK20 mRNA ekspresyon rölatif oranının ortalaması 0,07±0,12 median 0, minimum 0 ve maksimum 0,35 olarak saptanmıştır Gruplardaki CK20 mRNA ekspresyonu rölatif oranı ortalamaları incelendiğinde G2/T1? de 22,68 ile en yüksek değer saptanmıştır. Bunu takiben de, 1 olguda G1/Ta 4,23, 1 olguda G2/Ta 2,95 ve 8 olguda da G3/T2 2,88 yüksek olarak saptanmıştır. Grade artışı ile rölatif oranlar arasında bir korelasyon saptanamamıştır (p>0,05). Yüksek grade ve evredeki olgularda CK20 mRNA rölatif oranı oldukça düşük olarak saptanmıştır. Belirlediğimiz eşik dğere göre tespit ettiğimiz pozitif ve negatif olguların sonuçlarına göre yöntemimizin spesifitesi %69,56; sensitivitesi %67,65; pozitif tanısal değeri %85,19; negatif tanısal değeri %59,26 ve toplam tanı değeri %78,00 olarak hesaplanmıştır. Bu sensitivite ve spesifisite değerlerinden ROC eğrisi oluşturuldu. ROC eğrisi altındaki alanlar (AUC) 0,917 olarak (p=0,000) hesaplandı. ROC analizi ile CK20? nin en yüksek sensitivite (% 82,4) ve spesifiteye (% 81,2) sahip cutt-off değerinin 0,1224 olduğu saptandı. Sonuçlarımıza göre; yüksek veya düşük CK20 mRNA ekspresyonunun, mesane tümörlü olguların tanı ve takibinde geçerli bir yöntem olduğunu düşünmekte ve mesane kanserinin görüntülenmesinde halen standart referans olarak kullanılan sistoskopi aralığının genişletilmesinde katkıda bulunabileceğine inanmaktayız.