The effect of cyclosporin A via P53, MDM2 and PIK3CA gene expressions in glioblastoma multiforme cells

Amaç Siklosporin A nın Gliom hücrelerinde p53, MDM2 ve PIK3CA gen ekspresyonları üzerine etkisinin araltırılması amaçlanmıştır. Yöntem ve Gereç. Bu çalışmada, doz ve zamana bağımlı olarak, U87MG (glioblastom hücre hattı) hücreleri, CsA' nin 10, 30 ve 60µM konsantrasyonları ile 72 saat boyunca muamele edilmiştir. İlaç verilmeyen hücre grubu kontrol olarak kullanılmıştır. 72 saat boyunca, 24 saat aralıklarda toplanan hücrelerden total RNA izole edilmiş ve komplementer DNA sentezlenmiştir. p53, MDM2 ve PIK3CA gen ekspresyonlarının doza ve zamana bağlı değişim analizleri Real-Time Online RT-PCR cihazı ile Gliseraldehit–3-fosfatdehidrogenaz' a (housekeeping gen) oranlanarak kantitatif analizleri gerçekleştirilmiştir. Sonuç CsA' nın 10 ve 30 µM dozları zamana bağlı olarak, p53, MDM2 ve PIK3CA gen ekspresyonlarında madde verilmemiş kontrol grubuna göre artışa ve 60 µM dozunun da azalmaya neden olduğu saptanmıştır.. Bu bulgular, gliomlar ile ilişkili farmakolojik keşiflerde klinik önem taşımaktadır. CsA gibi iyi bilinen ilaçlarla gerçekleştirilen farmakolojik keşifler sonucunda, fonksiyonel p53 tümör supresörünün “up-regülasyonu” ve p53 ile tetiklenmiş apoptozisin indüksiyonu, gliom hücre ölümünün indüklenmesinde etkili bir strateji olabilir.

Objective: It is aimed to evaluate the effect of cyclosporine A in glioma cells via p53, MDM2 and PIK3CA gene expressions. Material Methods: U87MG cells are treated with 10, 30 and 60 µM CsA during 72 hour in time and dose dependent manner. The cell group that was not treated by any agent was approved of the control group. During 72 hour, total RNA was isolated from the cells which were collected every 24 hour and complementary DNA was synthesized from these cells. Dose and time dependent manner variation analysis of p53, MDM2 and PIK3CA gene expressions were performed by Real-Time Online RT-PCR. Relative analyses of these genes were achieved by rating the genes' expressions to GAPDH. Results: p53 expression showed an increase in 10μM dose of CsA in time and dose dependent manner and the rise of expression was four times at the 48th hour. MDM2 expression was increased approximately 1,5 times. When PIK3CA expression was evaluated, it was seen that, in the 24th hour, 30 μM dose of CsA showed 67% suppressed expression according to control group. Conclusions: Due to the results of the performed study by the well-known drug CsA, it is found that up-regulation of functional p53 tumor suppressor and induction of apoptosis triggered by p53 can be effective strategy in the induction of glioma cell death. These data carry a critical weight in the pharmacological explorations related with gliomas.