Termofilik bakterilerden lipaz üretimi ve karakterizasyonu
Yükleniyor...
Dosyalar
Tarih
2009
Yazarlar
Dergi Başlığı
Dergi ISSN
Cilt Başlığı
Yayıncı
Ege Üniversitesi
Erişim Hakkı
info:eu-repo/semantics/openAccess
Özet
Bu çalışmada değişik kaynaklardan elde edilen 104 termofilik bakteri izolatının ekstraselüler termostabil lipaz üretim kapasiteleri kalitatif olarak taranmıştır. Bunlardan sadece 26’si Rhodamin B Agar’lı modifiye Thermoactinomyces besiyerinde pozitif sonuç vermiştir ve potansiyel lipaz üreticisi olarak izolat EFTL17 bundan sonraki çalışmalar için seçilmiştir. İzolatın tanılaması 16S rRNA gen bölgesine göre yapılmış ve Gen Bankası’ndaki baz dizisi çakışmasına göre Thermobifida fusca EFTL17 olarak adlandırılmıştır. Kantitatif ekstraselüler lipaz aktivitesi spektrofotometrik yöntemle ölçülmüştür ve 5. günde lipaz aktivitesi 558,7 U/L bulunmuştur. Ekstraselüler lipaz üretimi üzerine çeşitli karbon, organik, inorganik azot kaynakları, ticari yaşlar, aşılama oranları, sıcaklık, indükleyici madde oranlarını ve üretim ortam pH’sının etkisi incelenmiştir. Thermobifida fusca EFTL17 suşuna ait ekstraselüler termostabil lipaz 10 kDa NMWC ultrafiltrasyon membran ile kısmi saflaştırılmıştır. T. fusca’dan üretilen ve kısmi saflaştırılması yapılan lipaz enziminin aktivitesi üzerine sıcaklık, pH, metal iyonları, inhibitörler, deterjanlar ve organik çözgenlerin etkisi araştırılmıştır. Elde edilen enzimin 25 oC’de inaktif olduğu, 55-85 oC arasında aktif olduğu, optimum aktiviteyi 65 oC ve pH 7,2’de gösterdiği; ayrıca pH 5,0 – 9,0 aralığında aktif olduğu bulunmuştur. Hg2+, Zn2+, Ni2+, Fe3+, Mn2+, Li2+ gibi ağır metaller lipaz aktivitesini % 55 – 68 oranında azaltmışlardır. Cu2+ % 26 oranında, Co2+ ise ancak % 10 oranında azaltmıştır. % 0,1 (ağırlık/hacim) konsantrasyonlarında Tween 80, Tween 20, SDS ve Brij 35’in % 45 – 68 oranında inhibe ettiği saptanmıştır. Ayrıca metanol, dimetilsülfoksit, etanol, izopropanol, aseton gibi organik çözgenlerde lipaz aktivitesinde artışa neden olmuşlardır. Kloroform % 86, hekzan % 60, toluen ise % 36 oranında lipaz aktivitesinde bir azalmaya neden olduğu belirlenmiştir. Kısmi saflaştırılan Thermobifida fusca EFTL17 lipazının aktivitesi üzerine etkili koşullar dikkate alındığında bu enzimin termostabil olduğu ve organik çözgenlerde aktivitesinin iyi olması onun biyoteknolojik uygulamalar için bir potansiyele sahip olduğunu göstermektedir.
Açıklama
Anahtar Kelimeler
Termofilik aktinomisetle, Termostabil lipaz, Lipaz üretimi ve karakterizasyonu, Thermophilic actinomycetes, Thermostable lipase, Lipase produciton and characterization, Biyoloji A.B.D.
