Yazar "Gürdal, Mehmet" seçeneğine göre listele

Listeleniyor 1 - 1 / 1
  • Küçük Resim
    Öğe
    Limbal doku türevli hücrelerin ın vitro çoğaltılmasında doku iskelesi olarak fonksiyonelleştirilmiş kollajen film kullanımının değerlendirilmesi
    (Ege Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, 2020) Gürdal, Mehmet; Ercan, Gülinnaz
    Gözümüzün ön yüzeyini oluşturan korneanın iyi bir görme işlevi için orijinal bütünlüğünün yaşam boyu korunması gerekmektedir. Korneanın işlevsel bütünlüğü, limbal bölgede yer alan limbal epitelyal kök hücreler tarafından rejenerasyon yoluyla korunarak yaşam boyu sürdürülür. Herhangi bir nedenle bu kök hücrelerin zarar görmesi, korneanın işlevini yitirmesine ve sonuç olarak ciddi görme kayıplarına neden olmaktadır. Bu patolojinin tedavisi için uygulanan geleneksel (otogreft, allogreft) yaklaşımlar kliniklerde arzu edilen güvenilirlikte başarılı olma konusunda yetersiz kalmaktadır. Bu nedenle ileri biyomühendislik yöntemlerinden olan doku mühendisliği alanında geliştirilen yöntemlere ihtiyaç duyulmaktadır. Günümüzde, in vitro çoğaltılan limbal epitelyal kök hücrelerin, riski düşük ve güvenilirliği yüksek bir tedavi seçeneği olarak hastaya sunulması en güncel tedavi yaklaşımıdır. Limbal epitelyal kök hücrelerin in vitro çoğaltılmasında kullanılan en yaygın destek materyali insan amniyotik membranıdır (iAM). Olumlu sonuçlarına rağmen, iAM'nin kliniklerde kullanımı ciddi standardizasyon problemleri ve bulaşıcı hastalık riskleri gibi olumsuzluklar nedeniyle kısıtlı kalmaktadır. Bu nedenle, iAM yerine geçebilecek alternatif bir destek materyali geliştirilmesine gereksinim duyulmaktadır. Geliştirilecek alternatif destek materyalinin başarısı, in vitro ortamda, hücrelerin doğal mikroçevresini olabildiğince taklit edebilmesine doğrudan bağlıdır. Bu yaklaşıma bağlı olarak bu doktora tez çalışmasında, destek materyali olarak hyaluronik asit (HA) ile zenginleştirilen ve 4-arm PEG süksinimidil glütarat (4SP) ile stabilize edilerek fonksiyonelleştirilen kollajen filmlerin ve hücre kültürü ortamının makromoleküler yönden kalabalıklaştırılmasının limbal doku türevli hücrelerin in vitro çoğaltılması üzerine etkisi araştırıldı. HA ile zenginleştirilerek ve 4SP ile stabilize edilerek üretilen kollajen bazlı filmlerin kimyasal karakterizasyonu 2,4,6-trinitrobenzen sülfonik asit (TNBSA) ve enzimatik degredasyon analizleri ile yapıldı. Üretilen filmlerin yapısal karakterizasyonları ise morfolojik ve mekanik yönden incelendi. Makromoleküler kalabalıklaştırıcı optimizasyonu primer insan korneal fibroblastları (HCFs) ile yapıldı ve belirlenen optimal kalabalıklaştırıcı limbal doku türevli hücrelere uyarlandı. Üretilen filmlerin ve makromoleküler kalabalıklaştırma yönteminin üretilen hücrelere etkisi öncelikle hücre morfolojisi, canlılığı, metabolik aktivitesi ve proliferasyon oranı açısından incelenerek değerlendirildi. Hücrelerin ekstrasellüler matriks (ECM) depolama düzeyleri sodyum dodesil sülfat-poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) ve immunositokimyasal yöntemlerle incelendi. Son olarak, üretilen hücrelerin immunositokimyasal yöntemle fenotipik analizi de yapıldı. HA ile zenginleştirilmiş kollajen filmlerdeki kollajen moleküllerinin kimyasal olarak en etkin çapraz bağlanması minimal 5 mM 4SP konsantrasyonunda sağlanmıştır. Ficoll™ kokteyl makromoleküler kalabalıklaştırıcı olarak HCFs kültüründe korneal stromaya özgü ECM (Kollajen I, III, IV, V, VI) birikimini en yüksek düzeyde sağlarken; aynı zamanda biriken ECM bileşenleri, doğal kornea stromasına benzer şekilde, homojen ve fibriller bir dağılım da sergilemektedir. HA ile zenginleştirilmiş ve 4SP ile stabilize edilerek fonksiyonelleştirilmiş kollajen filmler ve makromoleküler kalabalıklaştırıcı Ficoll™ kokteyl limbal doku türevli hücrelerin morfolojisini, metabolik aktivitesini ve canlılığını korurken, aynı zamanda proliferasyon oranlarını da arttırmaktadır. Ayrıca hücrelerin limbal epitelyal kök hücre mikroçevresine özgü ECM (Kollajen IV, fibronektin, laminin) birikimi arttırılırken fenotipik devamlılığı, incelenen işaretleyiciler (PAX6, vimentin, CK12) yönünden de korunmaktadır. Bu tezin bulgularına göre, makromoleküler olarak (Ficoll™ koktely ile) kalabalıklaştırılmış büyütme ortamı, HA (%0.5 w/w) ile zenginleştirilmiş ve 4SP (5 mM) ile stabilize edilmiş kollajen bazlı doku iskelesi üzerinde in vitro çoğaltılan limbal doku türevli hücrelerin canlılığını, metabolik aktivitesini ve proliferasyonunu destekleyip limbal epitelyal kök hücre mikroçevresine özgü ECM birikimini hızlandırırken, aynı zamanda hücrelerin fenotipik özelliklerinin de devamlılığını sağlamaktadır.