Şenyay Öncel, DenizYeşil Çeliktaş, Özlem2024-08-212024-08-212013http://155.223.63.101/tez3/2011muh006.pdfhttps://hdl.handle.net/11454/93474Araştırma Projesi -- Ege Üniversitesi, 2013Supercritical fluid technology, optimization, Ü-amylase, enzyme activity, kinetic parameters.;Süperkritik akışkan teknolojisi, optimizasyon, Ü-amilaz, enzim aktivitesi, kinetik parametreler.;Yüksek basıncın en güncel uygulamaları enzimlerin inaktivasyonuna yönelik olmasına rağmen, bazı enzimlerin aktivite ve kararlılıklarının yüksek basınç uygulamaları ile iyileştirdiğine dair bulgular bulunmaktadır. Bilindiği gibi enzim aktivite ve kararlılığını arttırmada birçok fiziksel, kimyasal ve genetik yaklaşımlar kullanılmaktadır. Son yıllarda da süperkritik akışkanların biyoteknolojik proseslere uygulanmasına yönelik çalışmalar artmıştır. Bu projenin amacı, sub- ve süperkritik karbondioksitin, enzim aktivite ve kararlılığını arttırmada alternatif bir yöntem olarak araştırılmasıdır. İşletme parametreleri olarak basınç (50-300 bar), sıcaklık (28-80 oC), CO2 akış hızı (2-10 g/dak) ve sürenin (60-180 dak), hidrolitik enzim olan Ü-amilaz'ın aktivite ve stabilitesi üzerine etkisi değerlendirilmiştir. Enzim için optimum çalışma koşulları belirlenmiştir.Basınca bağlı stabilizasyon ve aktivasyon için olası mekanizmalar NMR, SEM, FTIR ve XPS analizleri ile değerlendirilmiştir. Süperkritik CO2 ile proses edilmiş Ü-amilaz enzimlerinden en yüksek ve en düşük aktivite gösteren enzim örnekleri ile süperkritik CO2 - le muamele edilmemiş enzim örneklerinin aktivitelerine pH'ın ve sıcaklığın etkilerinin incelenmesi amacı ile farklı pH değerlerinde (4.0-9.0) ve sıcaklık koşullarında (20-80°C) aktivite tayinleri yapılmıştır. Kinetik sabitler (Km - Vmax), Lineweaver- Burk grafikleri oluşturularak belirlenmiştir. Böylece enzimin yapısındaki muhtemel değişimlerin enzimin kinetik parametrelerinde farklılık oluşturup oluşturmadığı belirlenmiştir.En yüksek aktiviteyi gösteren süperkritik CO2 ile proses edilmiş enzim, immobilize edilerek kontrol olan proses edilmemiş immobilize enzim ile birlikte ardışık enzimatik reaksiyonlarda kullanılmıştır. Her reaksiyon sonunda aktivite tayini yapılmış ve proses edilmiş enzimin rezidüel aktivitesi kontrolden düşük olana kadar ardışık reaksiyonlara devam edilmiştir. Akabinde, işlem görmüş enzim aktivitesinin ardışık reaksiyonlar sonrasında arttırılıp arttırılamayacağını araştırmak amacı ile optimum süperkritik CO2 koşullarında tekrar uygulama yapılmıştır.trinfo:eu-repo/semantics/closedAccessProject