Debeleç Bütüner, Bilge2025-05-302025-05-302024https://hdl.handle.net/11454/117455Bu tez projesinde, enflamatuvar mikroçevre koşullar1nda EMT mekanizmasındaki değişimler ile prostat hücreleri için kritik öneme sahip olan tümör baskılayıcı NKX3.1 proteininin bu mekanizmalar üzerindeki moleküler etkisi incelenmiştir. Çalışmalarımızda LNCaP hücreleri ile in vitro enflamatuvar mikroçevreyi temsil eden hücre kültürü modelleri tasarlanmıştır. Enflamasyon ilişkili NKX3.1 protein kaybı ve enflamatuvar ortamda EMT'nin indüklenmesinin hücre kültüründe temsil edilmesi amacıyla TNFα, TGF-β1 sitokin uygulamaları yapılmış, ayrıca hücrelere NKX3.1 ekspresyonu kazandırılarak EMT proteinlerinin seviyeleri ve hücre lokalizasyonlarının NKX3.1'e bağlı olarak farklılık gösterip göstermediği, hücrelerin anoikis direncine olan etkisi ve epitelyal-stromal etkileşimler üzerindeki etkileri araştırılmıştır. NKX3.1 ekspresyonuna ve enflamasyona bağlı olarak protein seviyesinde değişiklik gösteren EMT ilişkili proteinler incelenmiştir. NKX3.1, normal prostatın sağkalımında gerekli olan ve embriyonezisinde kök hücre fonksiyonu gösteren, gelişimsel açıdan kritik öneme sahip bir gendir. EMT fenotipi ile kanser kök hücresi fenotipi özdeş özelliklere sahiptir. Ektopik NKX3.1 seviyesi kazandırılan prostat kanseri hücrelerinde, NKX3.1 ile EMT ilişkili proteinlerin seviyesindeki artış korelasyon göstermektedir. Sonuç olarak, NKX3.1'in normal koşullarda ve düşük dozdaki enflamatuvar koşullarda tümör baskılayıcı rolü ile hücre canlılığı ve anoikis direncini baskıladığı, daha yüksek dozlardaki uzun süreli enflamatuvar koşullarda mezenkim benzeri hücre morfolojisini desteklediği ve EMT proteinlerinin seviyesel olarak artışında bir fonksiyonu olduğu sonucuna varılmıştır. Ko-kültür çalışmalarında bir arada kültürü yapılan WPMY1 hücrelerinin (prostat myofibroblast hücreleri), LNCaP hücrelerinde (epitelyal metastatik prostat kanseri hücreleri) enflamatuvar mikroçevre aracılıklı indüklenen EMT ilişkili proteinlerin ekspresyon seviyelerindeki artışa katkıda bulunduğu belirtilmiştir. Elde edilen sonuçlar enflamasyon ilişkili prostat kanseri gelişimi sürecinde EMT ilişkili yeni tedavi hedeflerinin tanımlanmasına katkıda bulunmaktadır.In this project, the molecular effect of the tumor suppressor NKX3.1 protein, which is critical for prostate cells, on the EMT mechanism in prostate cancer cell lines under inflammatory microenvironmental conditions was examined. In our studies, cell culture models representing the in vitro inflammatory microenvironment were designed with LNCaP, cells. To represent inflammation-related NKX3.1 protein loss and the induction of EMT in the inflammatory environment in cell culture, TNFα, TGF-β1 cytokine induction were performed, and NKX3.1 expression was introduced into the cells to determine whether the levels of EMT proteins and cell localizations differ depending on the presence of NKX3.1. Its effect on the anoikis resistance of cells and epithelial-stromal interactions was investigated. Expressional change of EMT-related proteins due to NKX3.1 expression and inflammation in LNCaP cells was examined. NKX3.1 is a developmentally critical gene that is required for normal prostate survival and functions in stem cell embryogenesis. The EMT phenotype and the cancer stem cell phenotype have identical characteristics. In prostate cancer cells having ectopic NKX3.1, there is a correlation between increased NKX3.1 and increased EMT-related proteins. In conclusion, NKX3.1 suppresses cell viability and anoikis resistance due to its tumor suppressor role in normal conditions and low-dose inflammatory conditions however, supports mesenchyme-like cell morphology in higher-dose, long-term inflammatory conditions and has a supportive role in increasing level of EMT proteins. In co-culture studies, it was determined that co-cultured WPMY1 cells (prostate myofibroblast cells) contributed to the increased EMT-related protein expressions induced by inflammatory microenvironment in LNCaPs (epithelial metastatic prostate cancer cells). Results contribute to identification of novel EMT-related therapeutic targets in inflammation-induced prostate cancer progression.trinfo:eu-repo/semantics/closedAccess23063Project