Rekombinant anti-HER2 antikoru üretimi için ekspresyon vektörü geliştirilmesi ve konak hücrede ekspresyonunun gösterilmesi
Yükleniyor...
Dosyalar
Tarih
2017
Yazarlar
Dergi Başlığı
Dergi ISSN
Cilt Başlığı
Yayıncı
Ege Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü
Erişim Hakkı
info:eu-repo/semantics/openAccess
Özet
Kanserle savaşan dünya nüfusunun giderek artması, bu alandaki yeni terapötik antikor keşfi ve mevcut antikorların biyobenzerlerinin üretimi gibi çalışmalara ağırlık verilmesini sağlamıştır. Bu tezde, insan epidermal büyüme faktörü reseptörü 2'yi (HER2) aşırı eksprese eden meme kanserli hastaların tedavisinde kullanılabilecek ve HER2 hücre dışı domainini hedefleyen monoklonal antikor Herceptin (Trastuzumab®, Roche) biyobenzerini salgılayan memeli hücre hattının geliştirilebilmesi için insanlaştırılmış anti-HER2 antikor genini içeren plazmit vektörlerinin elde edilmesi amaçlanmıştır. Memeli ekspresyon vektörlerinin geliştirilmesi gen optimizasyonu, klonlama ve transformasyon işlemleri ile gerçekleştirilerek restriksiyon enzimi ile kesim, multipleks PCR ve DNA dizi analizi ile doğrulanmıştır. Yapılan yüksek lisans tezi ile anti-HER2 antikorunun hem hafif hem de ağır zincirlerini içeren pIRES2/LC/HC ayrıca kontrol olarak kullanılacak antikorun sadece hafif zincirini içeren pIRES2-EGFP/LC ve antikorun sadece ağır zincirini içeren pIRES2/HC vektörleri elde edilmiştir. Ayrıca elde edilen vektörlerin konak E.coli hücresinde üretimi gerçekleştirilmiştir.
The flourishing world population fighting against cancer has caused to focus on novel strategies such as the discovery of novel therapeutic antibodies and the production of biosimilars for cancer therapy. The aim of this thesis is the development of plasmid vectors containing the humanized anti-HER2 antibody gene for the development of the mammalian cell line producing the monoclonal antibody Herceptin (Trastuzumab®, Roche) biosimilar is targeting the HER2 extracellular domain and can be used in the treatment of HER2 overexpressing breast cancer patients. The development of mammalian expression vectors was carried out by gene optimization, cloning and transformation and was verified by restriction enzyme digestion, multiplex PCR and DNA sequencing. In the master's thesis, the pIRES2/LC/HC containing both the light and heavy chains of the anti-HER2 antibody, pIRES2-EGFP/LC containing only the light chain of the antibody and the pIRES2/HC containing only the heavy chain of the antibody were obtained. In additon, the obtained vectors were produced in E.coli host cells.
The flourishing world population fighting against cancer has caused to focus on novel strategies such as the discovery of novel therapeutic antibodies and the production of biosimilars for cancer therapy. The aim of this thesis is the development of plasmid vectors containing the humanized anti-HER2 antibody gene for the development of the mammalian cell line producing the monoclonal antibody Herceptin (Trastuzumab®, Roche) biosimilar is targeting the HER2 extracellular domain and can be used in the treatment of HER2 overexpressing breast cancer patients. The development of mammalian expression vectors was carried out by gene optimization, cloning and transformation and was verified by restriction enzyme digestion, multiplex PCR and DNA sequencing. In the master's thesis, the pIRES2/LC/HC containing both the light and heavy chains of the anti-HER2 antibody, pIRES2-EGFP/LC containing only the light chain of the antibody and the pIRES2/HC containing only the heavy chain of the antibody were obtained. In additon, the obtained vectors were produced in E.coli host cells.
Açıklama
Anahtar Kelimeler
Meme Kanseri, İnsan Epidermal Büyüme Faktörü Reseptörü 2 (HER2), Rekombinant DNA Teknolojisi, Biyobenzer, Breast Cancer, Human Epidermal Growth Factor 2 (HER2), Recombinant DNA Technology, Biosimilar
