IDH mutant tip glioma'da, Temozolomid'in Chk1/2'nin inhibitörü AZD7762 ve BER yolağı komponenti APE1 inhibitörü ile kombinasyonunun anti-kanser etkilerinin incelenmesi ve bu iki kombinasyon ile hedeflemenin diğer tamir yolaklarını düzenleyen genlerin ekspresyonu üzerine etkilerinin değerlendirilmesi

Radyasyon ve DNA alkilleyici ajan olan Temozolomid (TMZ) gibi çoklu tedavi modülitelerine rağmen, malign glioma sağkalımı %6, 8 olarak kalmıştır. Gliomaların (II ve III. evre) % 90' ını tek bir mutant izositrat dehidrojenaz 1 (IDH1) aleli içermektedir. IDH1 mutasyonunun neden olduğu transformasyon, TMZ direnci ya da TMZ etkinliğinin azalması ile ilişkilendirilmektedir. Bununla birlikte, IDH1 mutant tümörlerinin TMZ' ye duyarlılaştırılması için henüz klinikte kullanılan bir yol mevcut değildir. Bu çalışmada, TMZ etkinliğini arttırmak amacıyla IDH1 mutant tümörlerinde TMZ ile birlikte APE1 ile BER yolağını ve AZD7762 ile Chk1/2'yi hedefleyerek hücrede olan DNA tamir yolaklarını modüle eden gen ekspresyonlarını, hücre ölümü ve hücre döngüsünde olan değişikliklerinin incelenmesi amaçlanmıştır. İnhibitörlerin TMZ ile kombine olarak etkinliği, IDH mutant U87-mg hücrelerinde WST-1 solüsyonu kullanılarak izobologram analizi ile, inhibitörlerin neden olduğu hasar sonrasında oluşan DNA çift zincir kırıkları "Alexa Fluor 488 Mouse anti-H2AX" kiti ile, AP bölgelerinin oluşum durumu "DNA damage AP sites Assay Kit" ile, iki farklı kombinasyonun DNA tamir yolaklarını regüle eden genler üzerindeki etkisi "RT² Profiler™ PCR Array Human DNA Damage Signaling Pathway" plakası ile, hücre döngüsü üzerine olan etkisini "Cycletest™ Plus DNA Reagent" ile değerlendirilmiştir. IDH mutant U87-mg hücrelerinde TMZ ve AZD7762 kombinasyonu 24, 48 ve 72. saatlerde sinerjik etki göstermiş ve TMZ sırasıyla 3, 37, 6, 31, 10, 26 doz azaltma indeksi (DRI) sergilemiştir. Bu ikili kombinasyon 24, 48 ve 72. saatlerde sırasıyla 1, 14 kat, 2, 56 kat, 3, 78 kat apoptoza neden olmuştur. Hücre döngüsü üzerindeki etkisi değerlendirildiğinde kombinasyon grubunun tedavi edilmeyen kontrol grubuna kıyasla G2/M arrestinin, 24. saatte 1, 29 kat, 48.saatte 2, 83 kat arttığı, 72. saatte ise 1, 73 kat artarak polyploidinin 5, 67 kat arttığı gözlemlenmiştir. G2/M arresti sonrasında çift zincir kırığı oluşumu değerlendirildiğinde H2AX fosforilasyonunun tedavi edilmeyen kombinasyona kıyasla 24. saatte 16, 66 kat, 48. saatte 14, 7 kat, 72. saatte 9, 3 kat arttığı saptanmıştır. ATM/Chk1 ve ATM/Chk2 downstream bölgesinde yer alan hasar yanıtı proteinlerinin ekspresyonlarının azaldığı, apoptozu regüle eden genlerin ise overeksprese olduğu belirlenmiştir. IDH mutant U87-mg hücrelerinde TMZ ve APE1 inhibitörü kombinasyonu, 24. saatte additif, 48. ve 72. saatlerde sinerjistik etki göstermiştir. APE1 inhibitörü, TMZ üzerindeki DRI, 24, 48 VE 72. saatlerde sırasıyla 1, 55, 1, 79, 6, 23 olarak belirlenmiştir. APE1 inhibitörü TMZ ile kombine edildiğinde 24. saatte apoptozun 3, 35 kat, 48. saatte 3, 18 kat, 72. saatte ise 2, 05 kat olduğu belirlenmiştir. Ardından kombinasyonun hücre döngüsünde olan etkisine bakıldığında 24. saatte 1, 11 kat G2/M arresti, 48. saatte 3, 98 kat S fazı ve 1, 49 kat G2/M arresti, 72. saatte ise 2, 21 kat G2/M ve 4, 32 kat polyploidy belirlenmiştir. G2/M arresti sonucunda çift zincir kırığı oluşumu analiz edildiğinde 24. saatte 2, 33 kat H2AX fosforilasyonunun arttığı, 48 ve 72. saatlerde anlamlı bir değişikliğin olmadığı saptanmıştır. Ayrıca 24. saatte AP bölgesinin birikiminde kontrol grubuna göre 1, 77 kat artış gözlemlenirken, 72. saatte 1, 58 kat artış saptanmıştır. Tüm bu sonuçlar doğrultusunda, Chk1/2 inhibitörü olan AZD7762, TMZ'nin etkinliğini artırarak, direnç gelişimi ile ilişkili genlerin ekspresyonunu azaltması ve hücreyi mitotik kaosa sürükleyerek apoptozu indüklemesi, tedavide kullanılabilecek büyük bir terapötik potansiyele sahip olduğunu göstermekte ve devamında aktivitesinin değerlendirilmesi için in vivo deneylere ihtiyaç duymaktadır. TMZ ve APE1 inhibitör III'ün kombinasyonda ilk 24 saatte çarpıcı bir antikanser etkinlik gözlemlenmiş ve bu ikili kombinasyonun ilk 24 saatteki güçlü etkisi hastaların TMZ'e maruziyet süresini azaltabilme konusunda ümit vadetmektedir. Bu çalışmanın devamı olarak ileriki çalışmalarda bulduğumuz veriler ile daha spesifik hedefler üzerine yoğunlaşmayı ve in vivo çalışmalar için zemin oluşturmayı ve literatüre katkı sağlamayı planlamaktayız.;Glioma, IDH mutant glioma, DNA tamiri, BER yolağı, DSB yolağı.;Glioma, IDH mutant glioma, DNA repair, BER pathway, DSB pathway.