Rekombinant anti-HER2 antikoru üretimi için devamlı hücre hattı geliştirilmesi

Kanser tedavisinde kullanılan biyolojik ürünler piyasadaki en pahalı ilaçlardan bazılarıdır ve sağlık sistemleri üzerinde artan bir mali yük oluşturmaktadır. 2020 yılına kadar birçok biyolojik kanser ilacının patent koruması bitecektir. Bununla beraber patent koruması biten orijinal ürüne alternatif üretilecek biyobenzerlerin artması ile ilaç pazarında rekabet oluşacak ve oldukça pahalı olan orijinator ilaçların yerini orijinallerinden daha düşük fiyatlı biyobenzer ürünler alacaktır. Önerilen bu projenin amacı, insan epidermal büyüme faktörü reseptörü 2'yi (HER2) aşırı eksprese eden meme kanserli hastaların tedavisinde, HER2 hücre dışı domainini hedefleyen monoklonal antikor Herceptin (Trastuzumab, Roche) biyobenzerini stabil olarak salgılayan Çin hamster yumurtalık (CHO) hücre hattının geliştirilmesidir. Anti-HER2 antikorunun ağır ve hafif zincirini içeren pIRES2/LC/HC olarak adlandırılan memeli ekspresyon vektörü gen optimizasyonu, klonlama ve transformasyon işlemleri ile geliştirilerek, restriksiyon enzimi ile kesim, multipleks PCR ve DNA dizi analizi ile doğrulanmıştır. pIRES2/LC/HC vektörü gentamisin direnç geni içerdiği için devamlı hücrelerin seçimi için kullanılacak geneticin duyarlılığı 500 ?g/ml olarak belirlenmiştir. CHO hücrelerine pIRES2/LC/HC vektörünün transfeksiyonu lipofektamin kullanılarak gerçekleştirilmiştir. 21 gün boyunca seçici ajan varlığında (500 ?g/ml içeren besin ortamı) devamlı hücreler seçilmiştir. Elde edilen karışık popülasyondan tek hücre kolonilerinin eldesi ise limitli dilüsyon tekniği kullanılarak gerçekleştirilmiştir.;Meme Kanseri, Anti-HER2 Monoklonal Antikoru, Biyobenzer, Devamlı Hücre Hattı.;Breast Cancer, Anti-HER2 Monoclonal Antibody, Biosimilar, Stable Cell Line.