Influenza A virüsüyle enfekte hücre hatlarında değişen müsin 1 (MUC1) ekspresyonlarının otofaji yolaklarına etkisinin gözlenmesi

Amaç: Bu çalışmada, influenza virüsü ile enfekte edilen kanser hücrelerinde; MUC1 ekspresyonlarında değişimlerin ve bunu takiben otofaji belirteçleri olan mTOR ve LC3B ekspresyonlarının gözlenmesi amaçlanmıştır. Yöntem: Tüm hücre dizileri (MDCK, RD, He-La, MCF-7, A-549) tek tabaka olarak çoğaltıldıktan sonra shall-vial yöntemi ile hücreler. İnfluenza virüsü inoküle edildi. 48 saatlik inkübasyon sonrasında tüm diziler mTOR, LC3B ve MUC1 için spesifik monoklonal antikorlar kullanılarak indirekt immünoflöresan yöntemi ile boyandı. Boyama işlemi başlamadan önce tüm hücre dizilerinin üzerinde bulunan sıvı kısım toplandı ve mTOR, LC3B ve MUC1 için özgül primer/prop setleri kullanılarak RT-PCR yöntemi ile yolakların gen ekspiresyonları saptandı. Tüm işlemler için influenza inoküle edilmeyen negatif hücreler kontrol olarak kullanıldı. İnfluenza virüsü üreme kontrolü için MDCK hücresi kullanıldı ve inoküle edilen her hücre dizisinin bir örneği influenza virüs monoklonal antikoru ile boyandı. Bulgular: RD hariç influenza inoküle edilen hücrelerin hepsinde LC3B, mTOR ve MUC-1için pozitif flöresan ışıma saptandı. İmmünoflöresan yöntemle, influenza inoküle edilmeyen MCF-7, He-La, RD ve A-549'da hiçbir ışıma saptanmadı.İnfluenza inoküle edilen hücre kültürlerinin üst sıvısında RD hücresi hariç MUC-1, LC3B ve mTOR için pozitif (Ct 20, 01-32, 04) sonuç alındı.İnfluenza virüsü inoküle edilmeyen hücrelerde sadece A-549 hücresinde yolaklar negatif bulundu. Diğer hücrelerde ise pozitif (Ct 21, 98-23, 78) sonuç alındı. Virüs ekimi yapılmayan RD hücrelerinde yolakların tümü pozitif bulundu. Sonuçlar: Sonuç olarak adenokanser yapısındaki hücrelerde influenza virüsü ile aktive olan otofaji yolaklarının varlığı gösterilmiştir. Ancak bu durum nükleik asit testleri ile tam olarak kanıtlanamamıştır. Bunun nedeni çalışmada kullanılan nükleik asit testlerinin sadece gen ekspresyonunu ve mRNA oluşumunu saptaması olabilir. Gelecek çalışmalarda, bu genlerin protein düzeyinde ifade edilmeleri daha ileri testlerle saptanmalıdır.