Deneysel nekrotizan enterokolit hücre kültürü modelinde resveratrolün intestinal mukozal hücre üzerindeki koruyucu etki ve mekanizmalarının belirlenmesi
Yükleniyor...
Dosyalar
Tarih
2013
Yazarlar
Dergi Başlığı
Dergi ISSN
Cilt Başlığı
Yayıncı
Ege Üniversitesi
Erişim Hakkı
info:eu-repo/semantics/openAccess
Özet
Bu çalışmada nekrotizan enterokolitte (NEK) resveratrol ile suplementasyonun intestinal mukoza hasarı ve restitüsyonu üzerine sonuçlarının ve etki mekanizmalarının belirlenmesi amaçlanmıştır. NEK, prematüre infantta enteral beslenme ve mikrobiyal antijenler tarafından aktive olan barsak kökenli mukozal immun sistemin neden olduğu sistemik inflamatuar yanıt ile karakterize, ince barsak ve kolonun sınırlı mukozal harabiyetinden total nekroza kadar değişebilen bir spektrum içinde iskemisidir. Aktive olan mukozal immun sistem sonucu proinflamatuar sitokinlerin (Tümör nekroz faktörü-alfa [TNF-a], interlökin 1-beta [IL-1Ý], nitrik oksit [NO], platelet aktive edici faktör [PAF] vb) ve siklooksijenaz 2 (COX-2), indüklenebilir nitrik oksit sentaz (iNOS) gibi enzimlerin salınımı artar. Inflamatuar sitokinler hücre hasarı oluşturarak enterosit apopitozuna, bunun neticesinde mukozal bariyer bütünlüğünün bozulmasına, bakteriyel translokasyona ve sonuçta sepsis gelişmesine neden olur. Ayrıca intestinal mukoza hücrelerinin yüksek migrasyon yeteneği, dolayısıyla tetiklenen apoptoz sonucu oluşan çıplak sahaların onarımı bozulmaktadır. Sonuç olarak, bu hastalıkta intestinal mukozal bariyer bütünlüğünün korunması ve oluşan hasarın hızla onarılması hastalık sürecinin kısaltılması ve komplikasyonlarının önlenmesinde kritik önem taşımaktadır [a]. İntestinal epitel hücreleri üzerindeki koruyucu etkilerinin araştırılmış olan resveratrol serbest radikal giderici ve hücre siklusunda anahtar enzimler üzerinde modülatör etki gösteren bir ajandır. Çeşitli çalışmalarda antioksidan, antiinflamatuar, antimutajenik, vazorelaksan, antiagregan, kemopreventif ve hepatoprotektif etkilerinin olduğu gösterilmiştir [b,c,d]. Kliniğimizde yürütülen hayvan deneyi çalışmasında ise resveratrolün deneysel nekrotizan enterokolit modelinde epitel bütünlüğü ve mukozal bariyerin korunmasına yardımcı olduğu, NEK bulgularını morfolojik olarak engellediği gösterilmiş ve villus epitelinde iNOS enzim düzeyleri çalışılarak intraepitelyal iNOS ekspresyonunu düzenlediği ortaya konmuştur [e]. Önceki çalışmamızdaki deneysel NEK modeli üzerindeki çarpıcı etkisi göz önüne alınarak resveratrolün nekrotizan enterokolitte, hem hücre hasarını tetikleyen birden fazla enzim yolağı, hem de hücre restitüsyonunu sağlayan migrasyon üzerine etkilerinin olduğu hipotezi kurulmuş ve bu çalışmayla bu etkilerin bir kısmının ortaya konulması amaçlanmıştır. Resveratrolün hücre migrasyonu üzerine etkilerini ortaya koymak amacıyla IEC-6 hücreleri kültür ortamında çoğaltıldıktan sonra deneysel yara oluşturulmuş ve sonrasında hücreler LPS ve sitokinler ile muamele edilmiş, bu muamele daha sonra önceden resveratrol ile muamele edilmiş hücrelerle tekrarlanmıştır. Hücrelerin migrasyon kapasitesi inverte mikroskop altında işaretlenerek alınan fotoğraflarla değerlendirilmiştir. LPS ve sitokin karışımının hücrelerin restitüsyon kapasitesinde azalmaya sebep olduğu, öncesinde resveratrol uygulanmasının bu artışı engelleyebildiği gösterilmiştir. Resveratrolün etkilerinin belirlenmesi için hücreler değişik dozlarda resveratrol ile muamele edildikten sonra aynı şekilde LPS ve sitokin karışımı ile muamele edilmiş ve enzim ekspresyonundaki değişiklikler değerlendirilmiştir. Yapılan deneylerle LPS ve sitokin uyarısının enterositlerde indüklenebilir nitrik oksit sentetaz, siklooksijenaz-2, fosforile fokal adhezyon kinaz ekspresyonunu arttırdığı, öncesinde resveratrol uygulanmasının bu artışı engelleyebildiği gösterilmiştir. Sonuç olarak, resveratrolün indüklenebilir nitrik oksit sentaz ve siklooksijenazı baskılamak yoluyla abartılı inflamasyon yanıtını baskılayarak, hem de fokal adhezyon kinazdaki artışı baskılayarak restitüsyondaki bozulmayı engelleyerek nekrotizan enterokolitten korumada etkin olabileceği söylenebilir.
Açıklama
Anahtar Kelimeler
Çocuk Cerrahisi A.B.D.
