Kornea örneklerinde etken mantarların klasik ve moleküler yöntemlerle araştırılması
Yükleniyor...
Tarih
2015
Yazarlar
Dergi Başlığı
Dergi ISSN
Cilt Başlığı
Yayıncı
Ege Üniversitesi
Erişim Hakkı
info:eu-repo/semantics/openAccess
Özet
Giriş ve Amaç: Kornea hastalıkları, katarakttan sonraki en önemli körlük nedenidir. Bunlar içinde fungal keratitler son 20-30 yıldır daha sık görülmeye başlanmıştır. Hem tanı yöntemlerinin gelişmesi, hem de kortikosteroit ve bağışıklığı baskılayıcı ilaçların kullanımının artması bundan sorumlu etkenler arasındadır. Tanının erken dönemde konması ve uygun antifungal tedaviye gecikilmeden başlanması iyileşmenin gerçekleşmesinde çok önemlidir. Bu çalışmada bir yıl boyunca Ege Üniversitesi Tıp Fakültesi Göz Hastalıkları Anabilim Dalı'nda fungal keratit kuşkusu ile izlenen hastaların, Ege Üniversitesi Tıp Fakültesi Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı Mikoloji Laboratuvarı'na gönderilen kornea kazıntı örneklerinde; mikroskobik inceleme ile mantar ve mantarlara ait yapıları görmek, örneklerden klasik konvansiyonel yöntemler ile etken mantarları üretmek ve direkt örnekten konvansiyonel polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) yöntemi ile mantarları saptamak amaçlanmıştır. İkincil olarak kornea kazıntı örneklerinde, klasik konvansiyonel yöntemlere ek olarak konvansiyonel PCR yöntemi ile mantar aranmasının mikoloji rutininde uygulanması hedeflenmiştir. Gereç ve Yöntem: Bu çalışmada fungal keratit kuşkulu hastalardan, göz hastalıkları hekimleri tarafından kornea kazıntı örnekleri alınmıştır. Örneğin bir bölümünden kültür için ekimler yapılmış, bir bölümü direkt ve boyalı mikroskobik incelemeler için, bir bölümü de moleküler incelemeler için kullanılmıştır. Örneklerin koyun kanlı agar (KKA) (bioMérieux, Fransa), Eosin-methylene-blue (EMB) agar (bioMérieux, Fransa), çukulata agar (bioMérieux, Fransa) ve antibiyotikli Saboraud dekstroz agar (SDA) (bioMérieux, Fransa) ile Staib agar (laboratuvarımızda hazırlanmıştır) besiyerlerine yarım ay şeklinde çizilerek ekimleri yapılmış ve 10 gün inkübe edilmiştir. Mikroskobik inceleme, %10'luk potasyum hidroksit (KOH) ve Gram boyama yöntemleri ile yapılmış, direkt mikroskobik incelemede mantara ait yapıların görülmesi durumunda kliniğe acilen bilgi verilmiştir. Kültürde üreyen mantarlar klasik konvansiyonel yöntemler ve Vitek-MS (bioMérieux, Fransa) otomatize sistemi ile tanımlanmıştır. Son olarak örneklere konvansiyonel PCR yöntemi uygulanmıştır. Bulgular: Bir yıllık sürede kornea kazıntı örneği alınan 60 hastanın 23 (%38,4)'ü kadın, 37 (%61,6)'si erkekti. Hastaların yaş ortancası 49 (3-85) olarak bulundu. Altmış örneğin beş (%8,3) tanesinin direkt mikroskobik incelemesinde mantar hifleri görüldü. Örneklerin 12 (%20)'sinde kültürde üreme saptandı. Bunların yedi (%11,6) tanesinde KKA (35°C) besiyerlerinde olan üremeler bakteri üremesi olarak değerlendirildi. Beş (%8,3) örnekte antibiyotikli SDA (26°C) besiyerlerinde olan üremeler mantar (maya mantarı ve küf mantarı) üremesi olarak değerlendirildi. Çalışmaya alınan 60 örneğin panfungal primerler ile yapılan konvansiyonel PCR sonucunda yedisinde (%11,6) mantara ait deoksiribonükleik asit (DNA) saptandı. Direkt mikroskobik inceleme ile mantar hifleri görülen beş örneğin, üçünde hem kültür hem de konvansiyonel PCR yöntemi ile pozitiflik saptandı; iki örneğin kültüründe üreme olmadı ancak konvansiyonel PCR yöntemi ile mantar DNA'sı saptandı. Kültüründe üreme olan ve konvansiyonel PCR yöntemi ile mantar DNA'sı saptanan iki örneğin de direkt mikroskobisinde mantar hifleri görülmedi. Sonuç: Bu çalışmada hastaların yaklaşık %12'sinde fungal keratit saptanmıştır. Direkt mikroskobik inceleme, kültür ve konvansiyonel PCR yöntemleri ile bulunan sonuçlar birbirleriyle uyumlu bulunmuştur. Kornea kazıntı örneğinde mantar varlığının konvansiyonel PCR yöntemi ile gösterilmesi, hem kültürde üretilemeyen etkenlerin saptanmasını sağlamış hem de tanı süresini klasik konvansiyonel yöntemlere göre kısaltmıştır. Bu yöntemin klinik mikrobiyoloji pratiğinde kullanılması, hastaya mikolojik tedavinin erken başlanmasını sağlayarak göz kaybını önleyecektir.
Açıklama
Anahtar Kelimeler
Keratit; Fungal keratit; Direkt mikroskobik inceleme; KOH; Kültür; Konvansiyonel PCR., Keratitis; Fungal keratitis; Direct microscopic eveluation; KOH; Culture; Convectional PCR.
