Bazı Gentiana türlerinde Agrobacterium rhizogenes aracılığı ile transforma saçaklı kök kültürlerinin oluşturulması ve dekonder metabolit içeriklerinin belirlenmesi

Arastırmada, saçaklı kök kültürleri, Gentiana cruciata L. türünde in vitro kosullarda üretilen üç farklı klona ait yaprak ve sap eksplantlarının A4, 15834, R1000 ve 8196 adlı yabani tipteki dört Agrobacterium rhizogenes ırkı kullanılarak enfekte edilmeleri ile olusturulmuslardır. Ko-kültivasyon ortamı olarak 50 oM AS (Asetosiringon), içeren yarı- MS (Murashige ve Skoog, 1962) tuzları ile B5 vitaminlerinden olusan hormonsuz besin ortamı kullanılmıstır. 2 ile 4. günlük ko-kültivasyon sonunda eksplantlar, bakteriyel kontaminasyondan kaçınmak için 250 mg l-1 Sefotaksim ilave edilen, aynı kompozisyondaki besin ortamlarına alınmıslardır. nokulasyondan 16-25 gün sonra eksplantların enfekte edilen kesik kısımlarında saçaklı kökler olusmustur. Saçaklı kök olusum oranları, sap eksplantlarında %33.3-5.6 arasında, yaprak eksplantlarında ise %6.7-0.0 arasında degisim göstermistir. Bu saçaklı kökler, daha sonra sıvı ortamlara aktarılmıslardır. Saçaklı kök büyütülmesi için kullanılan 3 besin ortamı içinde yarı-MS tuzları ile B5 vitaminlerinden olusan besin ortamının en uygun ortam oldugu belirlenmistir. Saçaklı köklerin trasformasyonları, rolC spesifik primerleri kullanılarak PCR ile dogrulanmıstır ve virC primerleri ile Agrobacterium rhizogenes kontaminasyonunun olmadıgı gösterilmistir. Bu arastımada, oniki saçaklı kök hattı elde edilmistir ve bunların sekonder metabolit içerikleri HPLC analizleri ile belirlenmistir. Kantitatif sonuçlar, tüm kök örneklerinde gentiopikrozitin en fazla bulunan madde oldugunu göstermistir. Ayrıca örneklerde loganik asit, svertiamarin ve sverozit metabolitleri belirlenmis ve miktarları saptanmıstır.;Gentiana, Hairy root, Agrobacterium rhizogenes, Secondary metabolite.;Gentiana, Saçaklı kök, Agrobacterium rhizogenes, Sekonder metabolit.