Zoledronat, imatinibe duyarlı kronik myelositer lösemi hattı olan K562'de stat yolağı üzerinden apopitozisi indüklenmekedir
Yükleniyor...
Tarih
2011
Yazarlar
Dergi Başlığı
Dergi ISSN
Cilt Başlığı
Yayıncı
Ege Üniversitesi
Erişim Hakkı
info:eu-repo/semantics/openAccess
Özet
AMAÇ:İmatinib direnci ve yanıtsızlığı, Kronik Myelositer Lösemi (KML) tanılı hastalarda ciddi bir sorundur. Mutasyonların yanı sıra, moleküler mekanizma olarak bcr/abl'nin bazı yan yolakları kullanarak kendi fosforilasyonunu arttırdığı da saptanmıştır. Bu yolaklardan bir tanesi geranil geranil transferaz enzimidir ve yapılan çalışmalar bu enzimin zoledronat ile inhibe edilebileceğini göstermiştir. Bu çalışmada; zoledronatın bu enzim dışında, hücre içi STAT yolağıyla da etkileşimi olabileceği teorisine istinaden İmatinib-duyarlı K562 [ Ph(+) KML hücre dizisi] kullanarak; Zoledronat'ın KML hücre hattında STAT yolağı üzerinden apopitozisi indüklediğinin gösterilmesi hedeflenmiştir. YÖNTEMLER:K562 hücre dizisi 24 saatlik zaman dilimlerinde zoledronat ile muamele edilmiş ve ilacın IC50 değeri XTT proliferasyon analizi ile bulunmuştur. Daha sonra, IC50 dozunda zoledronat ile muamele edilen hücrelerde Annexin V kiti kullanılarak apopitozis değerlendirilmiştir. Aynı zamanda, potansiyel hedef olan STAT yolağı üyelerinden STAT 3, STAT 5a ve STAT 5b'nin mRNA düzeyinde transkripsiyonu gerçek zamanlı PCR ile zamana bağımlı olarak ve kantitatif olarak değerlendirilmiştir. Verilerin doğrulanması amacıyla hücrelerde sitozolik fraksiyon ekstraksiyonu yapılmış ve western blot metodu ile protein ekspresyonları değerlendirilmiştir. SONUÇLAR:XTT sonuçlarına göre, zoledronat'ın K562 hücreleri üzerine doza bağımlı olarak sitotoksik etkileri olduğu belirlenmiş ve IC50 değeri 60 mikroM olarak saptanmıştır. Annexin V ile 60 mikroM zoledronat uygulanan hücrelerde apopitoz oranları 48-72-96. saatlerde sırasıyla %31-%34-%35 olarak bulunmuş ve %10 apopitozis saptanan kontrol grubuna göre anlamlı artış olarak değerlendirilmiştir. PCR verilerine göre STAT 3 ekspresyonunun zamana bağımlı olarak 96.saatte %70 baskılandığı, STAT 5a ekspresyonunun 72. saatten sonra baskılanmaya başlayarak 96. saatte %85 ile belirgin olarak baskılandığı ve STAT 5b ekspresyonunun yine zamana bağımlı olarak %72 düzeyinde baskılandığı gözlenmiştir. Western blot analizlerine göre, STAT 3, 5a ve 5b'nin protein ekspresyonlarında zamana bağımlı olarak, özellikle 72 ve 96.saatte belirgin azalma izlenmiştir. TARTIŞMA:Elde edilen sonuçlar zoledronat'ın KML'de STAT yolağı üzerinden STAT 3,5a ve 5b ekspresyonlarını baskılayarak apoptozisi indüklediğini göstermektedir. Bir bifosfonat olan zoledronat'ın in vitro koşullarda STAT yolağı üzerinden apotozisi indüklediğinin gösterilmesi, geniş klinik çalışmalar ile de doğrulanabilirse, KML tedavisine katkıda bulunacak bir terapötik ajan olarak umut verici gözükmektedir.
Açıklama
Anahtar Kelimeler
Kronik myeloid lösemi, zoledronik asit, STAT, apopitozis., Chronic myeloid leukemia, zoledronic acid, STAT, apoptosis., İç Hastalıkları A.B.D.
