Tank proteininin sinyal iletimindeki fonksiyonel analizi

NF- κB’ ler sitokinler, enfeksiyon ajanları ve DNA çift zincir kırıkları gibi uyarıcılarla aktive olabilen ve bunların sonucunda immun cevap, inflamasyon, hücre kurtarımı ve kanserde rol oynayan birçok genin ekspresyonunu düzenleyen transkripsiyon faktörleridir. NF- κB sinyal yolağı başlıca üç yolla aktive edilebilmektedir. Bunlar geleneksel (canonical), alternatif (non- canonical) ve DNA hasarında devreye giren yollardır. NF- κB sinyal yolağının aktivasyonu ve inaktivasyonu, bu yolakta görev alan proteinler arasındaki etkileşimlere bağlıdır. Canonical yolakta görev alan ve IKKε ile etkileşerek NF- κB sinyal yolağını aktive eden proteinlerden biri de TANK’ tır. TANK ve IKKε proteinleri arasındaki etkileşimi saptayabilmek amacıyla, TANK proteininin amino asit dizisinde post-translasyonel modifikasyon yoluyla fosforile oldukları düşünülen 10 tane serin ve treonin amino asiti (116, 117, 122, 123, 126, 225, 228, 230, 243 ve 244. amino asitler) alanin amino asitine değiştirilerek mutasyonları oluşturulmuştur. Aynı zamanda, TANK proteininin C- terminal delesyon mutantı da klonlanmıştır (ΔC 358- 425). Çalışma sonucunda TANK’ ın IKKε tarafından fosforile edildiği ve yabanıl tip TANK’ taki fosforilasyon miktarının mutant tipe oranla daha fazla olduğu tespit edilmiştir. Ayrıca, artan IKKε konsantrasyonlarına bağlı olarak yabanıl ve mutant tipteki TANK proteinlerin fosforilasyon miktarlarında da artış saptanmıştır. Bununla birlikte, değiştirilen 10 amino asite ilave olarak Cterminali de kısaltılan ΔC TANK’ ın düşük de olsa fosforile edildiği gösterilebilmiştir. Elde edilen tüm bu verilere dayanarak, değiştirilen 10 tane serin ve treonin amino asitinin TANK proteini fosforilasyonunda rol oynayabilecekleri düşünülmektedir. TANK ve SUMO1 proteinleri arasındaki ilişkiyi saptamak amacıyla TANK proteininin amino asit dizisindeki 4 lizin amino asiti (146, 231, 235 ve 282. amino asitler) arjinin amino asitlerine değiştirilmiştir. Yapılan çalışmalar sonrasında , TANK’ ın IKK tarafından fosforile edildikten sonra SUMO1 ile etkileştiği saptanmıştır. Özellikle 282. pozisyondaki lizinin bu etkileşimde rol oynayabileceği ileri sürülmüştür. Sonuç olarak, TANK proteininin post-translasyonel modifikasyonlarının tanımlanmasıyla, onun NF- κB sinyal yolağındaki işlevinin daha iyi anlaşılacağı ve hastalıkların patogenezinin çözümlenmesine yardımcı olacağı kanısındayız .