Ege Üniversitesi Hastanesi Yeni Doğan Yoğun Bakım Ünitesinden izole edilen potansiyel patojen A.Fumigatus türünün virulans faktörlerinden biri olan proteaz enzim aktivitelerinin araştırılması ve karakterizasyonu

Aspergillus fumigatus, virulance factors, protease enzymes, potential pathogen.;Aspergillus fumigatus, Virülans Faktörleri, Proteaz Enzimi, Potansiyel Patojen.;Bu çalışmada, bir yenidoğan yoğun bakım ünitesinin havasal florasından izole edilmiş potansiyel patojen fungal türlerden biri olan Aspergillus fumigatus adlı küfün moleküler tanılanması ve virülans faktörlerinden biri olan proteaz enziminin belirlenip karakterize edilmesi amaçlanmıştır. Morfolojik olarak klasik yöntemlerle tanımlanmış bu türe ait 29 farklı A.fumigatus izolatının iki farklı ülkede ve iki farklı araştırma merkezinde hem klasik DNA izolasyon yöntemleri kullanılarak, hem de standart kit prosedüründen yararlanılarak moleküler tanılaması yapılmıştır. Sekans işlemi sonucunda elde edilen baz dizileri NCBI gen bankasına yollanıp, sonuçları alınmıştır. Bu sonuçlar doğrultusunda, suşların %99,9 Aspergillus fumigatus olduğu kanıtlanmıştır. Proteaz taraması için içeriğinde Skim-milk bulunan besiyerleri kullanılmış ve bu suşların sütteki kazeini parçalamasından yararlanılmıştır. Kazeini parçalayıp, açık zon oluşturmaları sayesinde, enzim aktivitesi olduğu tespit edilmiştir. En iyi aktivitenin hangi Aspergillus fumigatus izolatına ait olduğunu belirlemek için ise; (Solid State Fermentation) SSF'de üretim yapılarak 3., 5. ve 7. günlerde alınan sıvılardan spektrofotometrik yöntemlerle ölçüm yapılmış ve en yüksek aktiviteye sahip olan izolat belirlenmiştir. eAP27 kodunu taşıyan bu suş için fermantasyon şartları optimize edildi. Optimum fermantasyon şartları 37{486}C ve 5 gündür. Bu suşun optimum çalışma koşulları incelendiğinde ise; inkübasyon pH: 7,5-8; en iyi aktivite gözlenen substrat: Casein olarak bulunmuş ve inhibitör maddeler ile metal iyonlarının enzim üretimi üzerinde etkileri olduğu gösterilmiştir.