Jel filtrasyon kromatografisi yöntemiyle hücre kültüründen ekstraselüler vezikül izolasuonunun geliştirilmesi
Yükleniyor...
Dosyalar
Tarih
2019
Yazarlar
Dergi Başlığı
Dergi ISSN
Cilt Başlığı
Yayıncı
Ege Üniversitesi
Erişim Hakkı
info:eu-repo/semantics/openAccess
Özet
Son yıllarda canlılardaki bütün hücreler tarafından salgılanan ekstraselüler veziküllerin (EV) çok önemli gelişimsel ve patolojik roller oynadığı ortaya konmuştur. Tıp ve eczacılık alanında bu veziküllerin genomik ve proteomik analizleri yapılarak hastalıkların oluşumu ve gelişimiyle ilgili önemli bilgiler elde edilmektedir. Ayrıca kanser hücrelerinden salgılanan EV'lerde bulunan özgül proteinler ve nükleik asitler, bu EV'lerin kanser tanısı amacıyla kullanılabilmesini mümkün kılmaktadır. Nanoboyutlu kesecik yapıları sayesinde tedavi amaçlı taşıyıcı sistemler olarak da değerlendirilmektedirler. Bu tür araştırmalarda kullanılabilmeleri için, EV'lerin hücrelerden salgılanan giğer bileşenlerden (serbest proteinler ve nükleik asitler, apoptotik cisimcikler, metabolik ürünler vb.) mümkün olduğunca arınmış olarak izole edilmesi gerekir. EV izolasyonu için kullanılan tüm yöntemlerin kendine özgü yetersiz yanları vardır ve yüksek saflıkta EV eldesi sağlayamamaktadır. Bu nedenle bu projede, hücre kültürü ortamından ekstraselüler veziküllerin diğer hücresel bileşenlerden arınmış olarak izole edilmesi amacıyla jel filtrasyon kromatografi tekniğinin değerlendirilmesi amaçlanmıştır. Öncelikle Calu1 hücrelerinin ortamı diyafiltrasyonla konsantre edilmiştir. Bu konsantre kültür ortamı Sepharose CL-4B dolgulu kolonlara yüklenerek elüe edilmiştir. Toplanan fraksiyonlarda protein konsantrasyonu ölçülmüş, SDS-PAGE ile protein yoğunluğu incelenmiş, DLS yöntemiyle partikül boyutu ölçülmüş ve SEM görüntüleme ile morfolojik analizleri gerçekleştirilmiştir. Denenmiş olan iki farklı uzunluktaki kolondan daha uzun olanı EV'leri ayrıştırmada daha etkili olmuştur. Elde edilen fraksiyonların SEM görüntülerine göre EV fraksiyonları tam olarak ayrışmış olmamakla birlikte önce daha büyük keseciklerin ve ardından daha ufak olanların elüe edilebildiği gözlenmiştir. Bu sonuçlara göre, jel filtrasyon kromatografisi farklı EV türlerinin ayrı olarak elde edilmesi bakımından ultrasantrifüj yöntemine göre daha iyidir. Yöntem, biyolojik sıvılara da uygulanarak hastalık tanısı ve tedavisi gibi bir çok alanda uygulama potansiyeli taşımaktadır.;Ekstraselüler Veziküller, Eksozomlar, Boyut Eleme Kromatografisi, Biyolojik Kesecikler.;Extracellular Vesicles, Exosomes, Size Exclusion Chromatography, Biological Vesicles.
Açıklama
Araştırmacılar; Ayşe Gülten Kantarcı, Hasan Akbaba, Gülşah Erel Akbaba
Araştırma projesi -- Ege Üniversitesi, 2019
Araştırma projesi -- Ege Üniversitesi, 2019
