Thermotoga maritima Sel12A selülaz enziminin katalitik özelliklerinin protein mühendisliği yoluyla geliştirilmesi

Selülaz, dünya genelinde en yaygın kullanılan üçüncü endüstriyel enzimdir. Selülozun hidrolizi amacı ile kullanılan selülazların düşük kararlılığı ve yüksek üretim maliyeti, endüstriyel kullanımlarını kısıtlamakta ve selülozun istenilen verimlilikte kullanımını engellemektedir. Bu tez çalışmasında, hipertermofilik Thermotoga maritima kaynaklı selülaz 12A enziminde protein mühendisliği yöntemleri kullanılarak amino asit değişiklikleri gerçekleştirildi. Amino asit değişiklikleri sonucu, optimum pH ve pH kararlılığı özellikleri değiştirilmiş mutant enzimler elde edilmesi amaçlandı. Selülazı kodlayan gende error-prone PCR yoluyla rastgele mutasyonlar oluşturuldu ve gen kütüphanesi Escherichia coli'ye aktarıldı. Gen kütüphanesi karboksimetilselüloz agarda Kongo kırmızısı ile boyama yöntemi kullanılarak tarandı. Asidik ve bazik pH değerlerinde doğal enzime kıyasla daha kararlı olan mutant enzimler belirlendi ve bazı enzimatik özellikleri karakterize edildi.