Kronik B hepatitli hastaların tanı, takip ve izleminde HBV-DNA miktarını saptamaya yönelik tasarlanmış ticari olmayan gerçek zamanlı bir polimeraz zincir reaksiyonu testinin klinik viroloji laboratuvarına uygunluğunun değerlendirilmesi
Küçük Resim Yok
Tarih
2012
Dergi Başlığı
Dergi ISSN
Cilt Başlığı
Yayıncı
Ege Üniversitesi
Erişim Hakkı
info:eu-repo/semantics/closedAccess
Özet
HBV DNA kantitatif, gerçek zamanlı PCR.;HBV DNA quantification, real-time PCR.;Klinik viroloji laboratuvarlarında HBV-DNA ölçümü için farklı yöntemler ve sistemler vardır. Hepatit B virüsü (HBV) DNA tespiti için TaqMan teknolojisine dayanan, yüksek tekrarlanabilir ve hassas gerçek zamanlı PCR testi geliştirilmiştir. Test, EUROHEP HBV DNA standartları içeren Viral Kalite Kontrol paneli ile doğrulanmıştır. Tasarlanmış olan gerçek zamanlı PCR protokolünün dinamik aralığı 373-10 . (10) genom kopya/mL.dir. Bu çalışmanın amacı, daha önceden Pas ve ark. tarafından ABI Prism 7700 cihazı için tasarlanmış PCR protokolünün ABI Prism 7500 (PE Biosystems) cihazı için uygunluğunun değerlendirilmesi ve rutin olarak kullanılmakta olan HBV DNA testi olan COBAS AmpliPrep-COBAS TaqMan 48 (Roche, Branchburg, NJ CAP-CTM) ile karşılaştırmaktır. 332 hastadan serum numuneleri alındı. Viral nükleik asitler BioRobot EZ1 Advanced cihazında EZ1 Virüs Mini Kit v2.0 kullanılarak saflaştırıldı. Bütün numunelerin amplifikasyon ve saptama adımları ABI PRISM 7500 (PE Biosystems) ile her bir örnek için iki kez yapıldı. ABI Prism 7500 (PE Biosystems) ile pozitif, COBAS AmpliPrep-COBAS TaqMan 48 (CAP-CTM; Roche, Branchburg, NJ) ile negatif örnekler; COBAS AmpliPrep-COBAS TaqMan 48 ile iki kez incelendi. 332 örneğin 176'sının sonuçları protokolün dinamik aralığı içinde idi. Dinamik aralık içinde olan 176 örneğin kantitatif sonuçları uyumlu idi (r2:0.88). 106 örnek her iki sistem ile negatif bulundu. Geri kalan 50 örnek içinde; 14'ü her iki yöntemin üst saptama sınırının üzerinde olduğu için kantitatif karşılaştırma yapılamadı. 30 örnek ABI Prism 7500 (PE Biosystems) ile düşük pozitif ancak COBAS AmpliPrep-COBAS TaqMan 48 (Roche, Branchburg, NJ CAP-CTM) ile negatif, altı örnek ABI Prism 7500 (PE Biosystems) ile düşük pozitif COBAS AmpliPrep-COBAS TaqMan 48 (Roche, Branchburg, NJ CAP-CTM) ile negatif idi. Farklı sonuç elde edilen örnekler için düşük değerlerde rastlantısal örneklemeye bağlı farklı sonuçlar elde edilebilir (Poisson dağılımı). Bu sonuçlar laboratuvar tasarımlı HBV DNA kantitatif protokolünün Klinik Viroloji laboratuvarında HBV DNA ölçümü için uygun test olduğunu göstermektedir. Bu yöntem rutin tanı ve klinik pratikte HBV ile infekte hastaların izlenmesi için uygun, ucuz, geniş dinamik sağlayan bir yöntemdir. Ancak düşük pozitifliklerdei farklı sonuçlar yine hasta takibinde tek yöntemin kullanılmasının uygun olduğunu göstermektedir.
Açıklama
Araştırma Projesi -- Ege Üniversitesi, 2012
