Kolon kanser hücre hatlarında safra asitleri ile indüklenen hücre proliferasyonunda muskarinik-3 reseptörlerinin ve mikroRNA'ların rolü (Saprom-1)

Safranın kolon epitelinde var olan muskarinik-3 (CHRM3) reseptörlere bağlandığı ve proliferatif etkisini bu reseptörler üzerinden gösterdiği in vitro olarak ortaya konmuştur. Son zamanlarda mikroRNA (miRNA)'ların gen ekspresyonunda önemli düzenleyici rol oynadıkları ve birçok malign hastalık patogenezinde yer aldıkları ortaya çıkarılmıştır. Kolon karsinogenezinde rol oynayan birçok miRNA tespit edilmiştir. Ancak kolon karsinogenezinde yer aldıkları bilinen CHRM3 ve miRNA' ların birbirleriyle olan ilişkileri ve etkileşimleri ile ilgili hiçbir veri ya da çalışma mevcut değildir. Çalışmamızda CHRM3' ü hedef alan olası miRNA'lar in silico analiz ile belirlenmiştir. Bu miRNA'ların H508 ve SNU-C4 kolon kanseri hücre serilerindeki ekspresyon profilleri, CHRM3 geninin mRNA seviyesindeki ekspresyon değişimleri qPCR ile, protein seviyesindeki ekspresyon değişimi Western Blot ile; sodium taurolithocholat ve atropin uygulaması sonrasında 6 günlük süreçte gerçekleşen hücre proliferasyonu da WST-1 yöntemiyle analiz edilmiştir. Apoptoz deneyi Annexin V yöntemi ile değerlendirilmiştir. H508 hücre serisi SNU-C4 hücre serisi ile karşılaştırıldığında CHRM3'ün 70 kat daha fazla eksprese olduğu saptandı. H508 hücre serisinin 6 günlük inkübasyonu sonrasında 5. günde 300 µM sodium taurolithocholat (ST) ve 1 µM atropin (A) kullanılarak maksimum proliferasyona (%300) ulaştığı saptandı. Buna karşın, SNU-C4 hücre serisinin proliferasyonunda anlamlı bir değişiklik görülmedi. H508 hücre serisinin ST ile muamele edilmesi sonrasında CHRM3 gen ekspresyonunda 2,53 katlık bir azalma saptanırken, bu genin protein ekspresyonunda anlamlı bir değişiklik saptanmamıştır. Ayrıca her iki hücre serisinin apoptoz analizlerinde de anlamlı bir değişiklik saptanmamıştır. CHRM3 genini hedef aldığı düşünülen 25 miRNA' dan 9 tanesinde anlamlı bir ekspresyon farklılığı saptanmıştır. Bunlardan 6'sının upregüle (hsa-miR129-5p, hsa-miR-30c-5p, hsa-miR-224-5p, hsa-miR-30b-5p, hsa-miR-522-3p, hsa-miR1246), 3'ünün ise downregüle (hsa-miR-30e-5p, hsa-miR-147b, hsa-miR-885-3p) olduğu saptanmıştır. Sonuç olarak, kolon kanser hücre serilerinde yapılan bu in vitro çalışmada; safra tuzlarının CHRM3 aracılığı ile proliferasyonu indüklemesi ve bu yolaktaki CHRM3 spesifik miRNA'ların rolü aydınlatılmaya çalışıldı.;Kolon kanser, muskarinik reseptör-3, mikroRNA.;Colon cancer, muscarinic receptor-3, microRNA.