Kriyoprezervasyonun yardımcı üreme teknikleriyle elde edilen büyükbaş hayvan embriyoları üzerine etkilerinin histolojik yöntemlerle incelenmesi
Yükleniyor...
Tarih
2012
Yazarlar
Dergi Başlığı
Dergi ISSN
Cilt Başlığı
Yayıncı
Ege Üniversitesi
Erişim Hakkı
info:eu-repo/semantics/openAccess
Özet
Amaç: Bu çalışmada yardımcı üreme teknikleri ile elde edilen büyükbaş hayvan embriyolarına uygulanan kriyoprezervasyon yöntemlerinin embriyolar üzerindeki etkilerinin araştırılması amaçlanmıştır. Yöntem: Mezbahaya kesime getirilen Holstein Cinsi 4-8 yaş aralığındaki sağlıklı ineklerden toplanan overlerden laboratuar ortamında folikül aspirasyon yöntemi ile elde edilen oositlerden; 3 tabakalı granüloza hücrelerine sahip olanlarına in vitro maturasyon işlemini takiben; ticari olarak satın alınan dondurulmuş boğa spermleri ile in IVF işlemi uygulandı. Slow freezing ve Vitrifikasyon gruplarındaki embriyolar dondurma işlemini takiben, -196 °C'deki sıvı azot içinde 1 gün süreyle saklandı. Kriyoprezervasyonun olası etkilerini histolojik yöntemlerle incelemek amacıyla 1gün sonra çözdürülen embriyolar; histoojik takip prosedürlerinden sonra ışık mikroskop, transmisyon elektron mikroskop, konfokal mikroskop ve floresan mikroskop ile incelendi. Bulgular: Slow freezing ve vitrifikasyon grubundaki embriyolarda çözdürme sonrası ZP'da incelme ve kırılma, hücre iskeleti hasarları ve blastomerler içerisinde yer alan organellerde meydana gelen dejenerasyonlara bağlı olduğu düşünülen hücre ölümleri gözlemlenmiştir. Mikroskobik incelemeler sonucunda hücre ölümlerinin nekroza bağlı geliştiği saptanmış, apoptotik bir sürece bağlı olacağını düşündüren bulgulara rastlanmamıştır. Kriyoprezervasyon ZP kalınlığında azalmaya neden olmaktadır. Blastosist gelişim oranları açısından kontrol grubu ile karşılaştırıldığında slow freezing ve vitrifikasyon yöntemiyle dondurulan embriyolarda çözdürme sonrası blastosist gelişiminin daha düşük olduğu, her iki grup arasında ise anlamlı bir fark bulunmadığı belirlenmiştir. Sonuç: Embriyo kriyoprezervasyonunun başlıca hedefi dondurma işleminden sonra çözdürülen embriyolarda yüksek canlılık oranlarının sağlanmasıdır. Dondurma çözündürme sonrası canlılık oranları, uygulanan yönteme, embriyoların büyüklükleri ve gelişim evrelerine, hücrelerin geçirgenlik özelliklerine, kullanılan kriyoprotektanların toksisiteleri ve ozmotik özelliklerine bağlı olarak değişiklik göstermektedir. Büyükbaş hayvanlarda in vitro şartlarda elde edilmiş, 4 hücreli aşamadaki erken evre embriyolarda slow freezing ve vitrifikasyon uygulamaları sonrası sağkalım oranlarının düşük olduğu görülmüştür. Elde edilen bulgulara göre 4 hücreli inek embriyolarında kriyoprezervasyon sonrası görülen hücre ölümlerinin nekroza bağlı geliştiği düşünülmüştür. Uygulanan yönteme ve döneme özgü özelliklere bağlı kriyoprezervasyonun zararlı etkilerin anlaşılması ve azaltılması amacıyla daha geniş kapsamlı araştırmaların yapılması gerekmektedir.
Açıklama
Anahtar Kelimeler
İnek, 4 hücreli Embriyo, Kriyoprezervasyon, TEM, Konfokal mikroskop, Floresan mikroskop., Bovine, 4 cells embryo, Cryopreservation, TEM, Confocal microscopy, Flouresan microcopy., Histoloji ve Embriyoloji A.B.D.