Dasatinib ile muamele edilen K562 hücre serisinde, Dasatinibin, PP2A katalitik ve regulatuvar alt birimlerinde, enzim aktivitesine ve protein ekspresyonu üzerine etkisinin değerlendirilmesi
Küçük Resim Yok
Tarih
2017
Yazarlar
Dergi Başlığı
Dergi ISSN
Cilt Başlığı
Yayıncı
Ege Üniversitesi
Erişim Hakkı
info:eu-repo/semantics/closedAccess
Özet
CML; PP2A; Dasatinib.;KML; PP2A; Dasatinib.;Kronik miyeloid lösemi (KML), kemik iliğinde beyaz kan hücrelerinde başlayan bir kanser tipi olup, BCR/ABL translokasyonuna bağlı artmış tirozin kinaz aktivitesiyle karakterizedir. Dasatinib bu amaçla kullanılan etkili bir TKI etkili olsa da KML hastalarının %20'si tedaviye yanıt vermemektedir. Bu durum, tedavide etkin olabilecek yolakların mekanizmalarının aydınlatılmasını gerektirmektedir. BCR-ABL1-indük1ü KML'de genomik ya da fonksiyonel değişime uğramış birçok hücresel olayda fonksiyon gören protein fosfotaz 2A (PP2A) gibi yapıların incelenmesi bu sorulara yanıtlardan biri olabilir. Protein fosfotazlar, hücrede dengesinin sağlanması açısından son derece önemlidir. Bu çalışmada amacımız, dasatinib ile muamele edilen K562 hücre serisinde, PP2A enzim aktivitesi ve alt birimlerinin protein düzeyinde ekspresyon değişimini saptamaktır. Bu amaçla dasatinibin KML'ye model oluşturan K562 hücre serisindeki sitotoksik etkisi WST-1 testi ile, apoptotik etkisi Annexin V ve Apo Direct Tunnel metodu ve sitostatik etkisi ise Hücre Döngüsü Analizi ile değerlendirilmiştir. PP2A'nın apoptoz ve hücresel sağkalım üzerindeki etkisini belirlemek için PP2A inhibitörü olan Okadaik asit (OA) ile çalışılmıştır. Dasatinib ile muamele edilen K562 hücre serisindeki değişen PP2A'nın enzim aktivitesi serin/treonin fosfataz analiz kiti, PP2A'nın alt birimlerindeki protein ifade düzeyleri ise Western Blot analizi ile değerlendirilmiştir. Dasatinibin, K562 hücre serisindeki sitotoksik etksi 4,6 nM olarak belirlenmiştir. OA'nın PP2A'yı baskılanmasından dolayı apoptozda artış belirlenmiştir. İnhibitörler nedeniyle baskılanan PP2A'dan dolayı hücre döngüsü tutuklanmasında da değişiklikler kaydedilmiştir. Dasatinib ile muamele edilen hücrelerin PP2A enzim aktivitesi 72.saatte kontrole kıyasla azalmıştır. Western Blot analizi ile dasatinibin PP2A C alt birimin protein seviyesinin kontrole kıyasla azaldığı bulunmuştur. Sonuç olarak, dasatinibin hücre homeostazında rol oynayan PP2A'nın enzim seviyesini ve protein seviyesinde değişime neden olduğu belirlenmiştir. Böylece PP2A inhibitörlerinin KML tedavisinde terapötik hedef olarak katkı sağlayabileceğini düşünmekteyiz.
Açıklama
Araştırmacılar; Sezgi Kıpçak, Çağdaş Aktan, Çığır Biray Avcı, Cumhur Gündüz, Güray Saydam
Araştırma Projesi -- Ege Üniversitesi, 2017
Araştırma Projesi -- Ege Üniversitesi, 2017
