Prostat kanserinde kanser kök hücresi ve Notch yolağı ilişkisinin incelenmesi

Amaç: Bu çalışmada DU145 insan prostat kanseri hücrelerinden izole edilen CD133?/ CD44? ve non-sorting grup hücrelerden oluşturulan steroidlerdeki kök hücre belirteçlerine ait değişikliklerin incelenmesi ve kanser dokusunda, süregelen proliferasyonlar ve diğer malign transformasyondan etkilenebileceği düşünülen kanser kök hücresinin araştırılması planlanmıştır. CD133?/ CD44?yüzey belirtecine göre ayrılacak olan kanser kök hücreleri ile bu grubun dışında kalan ve izolasyonu yapılmayan non-sorting kanser hücreleri arasındaki değişiklikler incelenecektir. Çalışmaya bu iki ayrı hücre gurubu (kök hücre-kök hücre olmayan kanser hücresi) tek tabaka hücre kültürlerinde ve 3 boyutlu sferoid modelde çoğaltılarak devam edilecektir. Burada amaç kanser hücrelerinde seri pasajlar sonrası bile değişebilen hücre içi sinyal ileti sistemleri ve yüzey belirteclerinin tek tabaka kültürlerdeki seri pasajlar sonrasında ve özellikle, tümör dokusu üç boyutlu yapı kazandığında (sferoid formasyonu) değişip değişmediğinin gösterilmesidir. Yöntem: İnsan prostat karsinoma hücreleri DU145,%10 Fetal Bovine Serum (FBS),100 IU/ml penicilin, 100 g/ml steptomycin, 2 mM glutamine içeren DMEM ile çoğaltılacaktır. DU145 prostat kanser hücrelerinde CD133? ve CD133? hücreleri ''Fluorescence-activated cell sorting (FACS) yöntemi ile FACS Aria (Bekton Dicklinson Immunocytometry Systems) kapıları kullanılarak izole edileceklerdir. Hücre ayırımı (sort) kapıları CD133? (FITC) ile işaretli bölümlerden alınacaktır. CD133? ve CD133? DU145 Prostat Ca hücreleri FACS ile izole edildikten sonra, eritilmiş %3'lük Agar solusyonu (60 - C) ve kültür ortamı (4 - C) karışımı {dollar}1 ;DU145, CD 133, FACS, FITC, Notch.