Türkiye'de patojenik Yersinia enterocolitica izolasyonu ve İn Vivo koşullardaki lipopolisakkarit genlerinin ekspresyonu
Yükleniyor...
Dosyalar
Tarih
2015
Yazarlar
Dergi Başlığı
Dergi ISSN
Cilt Başlığı
Yayıncı
Ege Üniversitesi
Erişim Hakkı
info:eu-repo/semantics/openAccess
Özet
Yersinia enterocolitica Türkiye'de çok nadiren karşılaşılan gıda kaynaklı bir patojendir. Bu çalışmada Türkiye'nin İzmir bölgesinden toplanan çeşitli insan, domuz ve çevresel örnekler farklı kültivasyon ve zenginleştirme metotları kullanılarak Y. enterocolitica varlığı açısından test edilmiştir. Toplam olarak dokuz adet patojenik Y. enterocolitica suşu izole edilmiştir; 5 suş domuz dışkısı ve gübre örneklerinden, 4 suş ise atık su örneklerinden saptanabilmiştir. Diğer taraftan, diyare teşhisi konulmuş 102 hastanın dışkı örneklerinden ve körfez, kanal, belediye havuz ve çeşme suyu olmak üzere 12 örnekten Y. enterocolitica suşları izole edilememiştir. Dokuz adet Y. enterocolitica suşunun biyokimyasal ve serolojik karakterizasyonu sonucu suşların üç farklı biyoserotipe ait olduğu ortaya konulmuştur: 4/O:3, 2/O:9 ve 2/O:5,27. Saptanan Y. enterocolitica suşları; ystA, ystB, yadA, virF/lcrF ve ail virulens faktörlerine özgü PCR ve fenotipik patojenite analizlerine dayandırılarak patojen olarak belirlenmişlerdir. İzmir bölgesinden; domuz ve atık su örneklerinde, patojenik Y. enterocolitica suşlarının tespit edilmesi Y. enterocolitica suşlarının halk sağlığı için potansiyel risk olduğunu göstermektedir. Lipopolisakkarit Y. enterocolitica suşları için en önemli virülens belirteçlerinden biridir. Sıcaklık Y. enterocolitica suşlarının çoğu serotipinde olmasa bile birçok virülens faktör genlerinin regülasyonunu sağlamaktadır. Dolayısı ile lipopolisakkarit genlerinin in vivo koşullardaki regülasyonunu anlamak; konak ve patojen arasındaki etkileşimin çözülmesine yardımcı olacaktır. Reporter genler, ilgili promotorların kontrolü altında analiz edilecek bir proteini kodlayan genlerin transkripsiyonunu endirekt olarak anlamak için kullanılmaktadır. Bu kapsamda, Y. enterocolitica O:3 serotipine ait lusiferaz reporter suşları dizayn edilmiştir. Öncelikle lusiferaz substrat biyosentezini yöneten luxCDE genlerini içeren YeO3- LuxCDE suşu oluşturulmuştur. Daha sonra lusiferaz kodlayan luxAB kasedi YeO3-LuxCDE genomuna, O-antijen ve outer core gen bölgelerinin promotorlarının akışaşağı bölgesine yerleşecek şekilde eklenmiştir. İn vitro koĢullarda, outer core reporter suşu, oda sıcaklığına göre 37°C'de daha fazla ifade olurken, O-antijen reporter suşunun ise oda sıcaklığında daha fazla ifade edilmektedir. Balb/c fare modelleri bu reporter suĢlar ile outer core ve O-antijen genlerinin enfeksiyon sırasında hangi dokularda ifade olduğunu belirlemek için enfekte edilmişlerdir. Ölçümler IVIS spektrum cihazı ile yapılmış ve enfeksiyonun 5. güne kadar endirekt mRNA ifadesi gözlemlenmiştir. Enfeksiyon sonrasında outer core ve o-antijenin özellikle sindirim sisteminde aktif olarak ifadesinin gerçekleştiği ve 5. gün sonrasında reporter suşlarının kemik iliğine kadar yayıldıkları gözlenmiş ve LPS'in patogenezdeki önemi vurgulanmıştır.
Açıklama
Anahtar Kelimeler
Yersinia enterocolitica, domuz çiftliği, atık su, LPS, diyare, PCR, LuxCDABE, IVIS spektrum, Outer core, O-antijen, in vivo gen ifadesi., Yersinia enterocolitica, pig farm, wastewater, LPS, diarrhea, PCR, LuxCDABE, IVIS spectrum, Outer core, O-antijen, in vivo gene expression.
