Ege bölgesinde kültürü yapılan deniz balıklarından izole edilen Listonella Anguillarum (Vibrio Anguillarum) izolatlarının patojenite durumunun multiplex PCR yöntemiyle araştırılması
Yükleniyor...
Tarih
2014
Yazarlar
Dergi Başlığı
Dergi ISSN
Cilt Başlığı
Yayıncı
Ege Üniversitesi
Erişim Hakkı
info:eu-repo/semantics/openAccess
Özet
Ülkemizde akuakültür sektörü son yıllarda büyük bir gelişme kat etmiş, Avrupa'da ve dünyada önemli bir konuma gelmiştir. Bu sektör içerisinde en önemli yeri başta çipura ve levrek olmak üzere deniz balığı işletmeleri oluşturmaktadır. Ancak denizlerdeki ağ kafeslerde artan stok yoğunluğu ve yavru transportu enfeksiyon hastalıkların görülme sıklığını ve yaygınlığını arttırmıştır. Bu enfeksiyon etkenleri içerisinde bakteriyel etkenler büyük bir yer tutmakta olup, Listonella anguillarum (eski adı Vibrio anguillarum) en önemli bakteriyel balık patojenidir. L. anguillarum, her yaştan deniz ve tatlı su balığında hemorajik septisemi hastalığını oluşturur ve bu hastalığa bağlı kayıplar akuakültür sektörünün en önemli sorunlarındandır. Bu önemli sorun ile mücadele edebilmek için, hastalık mihraklarındaki L. anguillarum izolatlarının kültürel ve moleküler yapısı, antibiyotik profilleri ve patojenitesi aydınlatılmadır. Ülkemizde L. anguillarum'un kültürel özellikleri ve antibiyotik profilleri üzerine çalışmalar yer almakta olup, moleküler özellikleri ve patojenitesi ile ilgili az sayıda çalışma bulunmaktadır. Diğer taraftan, Türkiye'de L. anguillarum'un virulans hemolizin genlerinin araştırıldığı bir literatür bilgisine rastlanmamıştır. Hemolizin genleri L. anguillarum'un patojenitesine önemli bir katkı sağlar ve hastalığa hemorajik septisemi denmesinin en önemli sebebidir. Bu projede 2006-2013 yılları arasında, İzmir Bornova Veteriner Kontrol Enstitüsü, Balık Hastalıkları Ulusal Referans Laboratuvarı'na, hastalık teşhisi amacıyla gönderilen levrek, çipura ve alternatif deniz balığı türlerinden izole edilen 51 adet L. anguillarum izolatı üzerinde çalışılmıştır. Proje ile izolatların fenotipik özellikleri ve antibiyogram duyarlılıkları tespit edilmiş, amiB genlerindeki tür spesifik bölge çoğaltılarak PZR ile doğrulanmıştır. Kültürel ve moleküler yöntemlerle L. anguillarum olduğu tespit edilen izolatlar virulasn hemolizin genleri (vah 1, vah 2, vah 3, vah 4, vah 5) yönünden multiplex PZR yöntemi ile araştırılarak patojeniteleri hakkında bilgi edinilmeye çalışılmıştır. Bunun yanında özgün olarak sentezlenen primerler kullanılarak temsili izolatlar üzerinde farklı bir PZR çalışması yapılmış, PZR ürünleri sekans analizine yollanarak izolatlar arasındaki flogenetik ilişki araştırılmıştır. Sonuç olarak, Ege Bölgesinin farklı koylarındaki balık çiftliklerinde yetiştirilen deniz balıklarından izole edilen 51 adet Listonella anguillarum izolatının üç çeşit fenotipik karakterizasyon gösterdiği, en duyarlı oldukları antibiyotiğin florfenicol, en dirençli oldukları antibiyotiğin ise Amoxycline olduğu; etkeninin identifiye edilmesinde konvansiyonel kültür yöntemi ile amiB gen bölgesindeki spesifik bölgenin çoğaltıldığı PZR yönteminin % 100 uyumlu olduğu, özgün olarak dizayn edilen primerlerin kullanıldığı PZR yönteminin L. anguillarum'u identifiye etmekte kullanılabilir olduğu fakat V. ordalii ile kros reaksiyon verebileceği; kullanılan izolatların hemolizin genleri yönünden zengin olduğu, özellikle vah 1 ve 4' sahip olan izolatların yüksek mortaliteli enfeksiyonlara sebep olabildiği, vah 2, 3 ve 5 e sahip izolatların nispeten daha az mortaliteye sebep olabilecekleri bilgilerine ulaşılmıştır. Flogenetik araştırma kapsamında izolatların çoğaltılan gen bölgelerinde polimorfizme ratslanmamıştır.
Açıklama
Anahtar Kelimeler
Listonella anguillarum, Fenotipik Karakterizasyon, Antibiyogram, PCR, Multiplex PCR, Hemolizin genleri., Listonella anguillarum, Phenotypic Characterisation Antibiograme, PCR, Multiplex PCR, Haemolysin genes, Biyoloji A.B.D.
