Zoledronate, imatinibe duyarlı kronik myelositer lösemi hattı olan K562'de STAT yolağı üzerinden apoptozisi indüklemektedir
Küçük Resim Yok
Tarih
2012
Yazarlar
Dergi Başlığı
Dergi ISSN
Cilt Başlığı
Yayıncı
Ege Üniversitesi
Erişim Hakkı
info:eu-repo/semantics/closedAccess
Özet
Son yıllarda kronik myelositer lösemi (KML) tanısında ve tedavisinde ciddi gelişmeler olmuştur ve imatinib mesilat'ın klinik kullanıma girmesi ile birlikte hastalığın seyri ve prognozu değişmiştir. Dünyada imatinible ilgili klinik deneyim 10 yıla yaklaşırken, beraberinde imatinib intoleransı ve imatinib direnci gibi kavramları getirmiştir. imatinib direnci konusunda en iyi tanımlanan mekanizma, imatinib bağlanma bölgesini ilgilendiren mutasyonlard.ır ve buna istinaden, bu direnci yenmek için ikinci kuşak tirozin kinaz inhibitörleri geliştirilmiştir. Ancak ikinci kuşak tirozin kinaz inhibitörlerinin yetersiz kaldığı bir grup hasta vardır. Moleküler mekanizma olarak mutasyonlar dışında, bcr/abl'nin bazı yan yolakları kullanarak kendi fosforilasyonunu arttırdığı da saptanmıştır. Bu yolaklardaıı bir tanesi geranil geranil transferaz enzimidir ve yine yapılan çalışmalar bu enzimin zol.edronate ile inhibe edilebileceğini göstermiştir. Bu çalışmada; zoledronatın bu enzim dışında, hücre içi STAT yolagıyla da etkileşimi olabileceği teorisine istinaden; duyarlı K562 [ Ph(+) KML hücre dizisi] kullanarak; Zoledronat'ın KML hücre hattında Stat yolağı üzerinden apoptozisi indüklediğinin gösterilmesini hedeflenmiştir. K562 hücre dizisi 24 saatlik zaman clilimlerinde zoledronat ile muamele edilmiş ve ilacın IC50 değeri XTT proliferasyon analizi ile bulunmuştur. Daha sonra, IC50 dozunda zoledronat ile muamele edilen hücrelerde Annexin V kiti kullanılarak apopitozis değerlendirilmiştir. Elde edilen sonuçların açıklanabilmesi için, potansiyel hedef olan STAT yolağı üyelerinden STAT 3, STAT 5a ve STAT 5b'nin (m)RNA düzeyinde transkripsiyo.nu PCR ile zamana bağımlı olarak araştırılmıştır. Verilerin doğrulanması amacıyla hücrelerde sitozolik fraksiyon ekstraksiyonu yapılmış ve western blot metodu ile protein ekspresyonları değerlendirilmiştir. XTT sonuçlarına göre, zoledronat'ın K562 hücreleri üzerine doza bağımlı olarak sitotoksik etkileri olduğu belirlenmiş ve IC50 değeri (hücrelerin %50'sinin proliferasyonunu baskılayan doz) 60 p,M olarak saptanmıştır. Annexin V ile 60 ILIM zoledronat uygulanan hücrelerde apopitoz oranları 48-72-96. saatlerde sırasıyla %31- %34-%34 olarak bulunmuş ve %10 apopitozis saptanan kontrol grubuna göre anlamlı artış olarak değerlendirilmiştir (p=0,03). PCR verilerine göre STAT 3 ekspresyonunun zamana bağımlı artan bir ivmeyle 96.saatte %70 baskılaridığı '(p=0,014), STAT Sa ekspresyonunun 72. saatten sonra baskılanmaya başlayarak 96. saatte %85 ile belirgin olarak baskılandığı (p<0,001) ve STAT 5b ekspresyonunun yine zamana bağımlı artış göstererek %72 düzeyinde baskılandığı gözlenmiştir (p=0,02). Western blot analizleri protein ekspresyonlarının da düştüğü belirlenmiştir. Elde edilen sonuçlar zoledronat'm KMI]de STAT yolağı üzerinden STAT 3,5a ve 5b ekspresyonlarını baskılayarak apoptozisi indüklediğini göstermektedir. KMI.. tedavisinde tirozin kinaz inhibitörlerine direnç gelişimi yeni tedavi seçenekleri geliştirme ihtiyacını doğurmuş olup, apopitozisin gen ürünleri tedavi için potansiyel hedeflerdir. Bir bifosfonat olan zoledronat'ın in vitro koşullarda STAT yolağı üzerinden apopitozisi indüklediğinin gösterilmesi, geniş klinik çalışmalar ile de doğrulanabilirse, KML tedavisine katkıda bulunacak bir terapötik ajan olarak umut verici gözükmektedir.;Zoledronic acid, STAT, apoptosis, k562.;Zoledronik asit, STAT, apopitozis, k562.
Açıklama
Araştırmacılar; Buket Kosova, Burçin Tezcanlı Kaymaz, Nur Selvi, Ayşegül Dalmızrak
Araştırma Projesi -- Ege Üniversitesi, 2012
Araştırma Projesi -- Ege Üniversitesi, 2012
