Karpuz (citrullus vulgaris) alfa-galatozidazının ve sentetik polimerlerde immobilizasyonu
Küçük Resim Yok
Tarih
2000
Yazarlar
Dergi Başlığı
Dergi ISSN
Cilt Başlığı
Yayıncı
Ege Üniversitesi
Erişim Hakkı
info:eu-repo/semantics/closedAccess
Özet
Alpha- Galaktozidazlar (alpha - D - galaktohidrolaz, EC 3.2.1.22), doğada oldukça yaygın olarak bulunan hidrolaz sınıfı enzimlerdir. Bitkisel, hayvansal ve mikrobial kaynaklardan çok çeşitli tekniklerle izola edilerek saflaştırılan bu enzimler, galaktooligosakkaritler ve polisakkaritlerde bulunan alpha- 1.6- galaktoz birimlerini hidrolizlerler. Özellikle şeker endüstrisinde önemli bir potansiyele sahip olan alpha- galaktozidazlar, kompleks karbonhidratların biyolojik fonksiyonlarının belirlenmesinde, organik sentezlerde, yapı analizlerinde ve medikal alanda oldukça önemli uygulama alanları olan bir enzimdir. Bu nedenle çeşitli kaynaklardan enzimin ekonomik ve verimli bir şekilde izolasyonu, saflaştırılması ve karakterizasyonu son yıllarda üzerinde en çok durulan konular arasındadır. Tüm bunlara rağmen enzim ile yapılan immobilizasyon çalışmaları ise yok denecek kadar azdır. Bu çalışmada, karpuzdan ( Citrullus vulgaris ) kısmi olarak saflaştırılan alpha- galaktozidazın doğal ve sentetik polimerlerde kovelent bağlama ile immobilizasyonu gerçekleştirilmiştir. Karpuz, kolay temin edilebilmesi, ekonomik bir kaynak ve enzim aktivitesi açısından zengin olması nedeniyle tercih edilmiştir. Karpuz alpha- galaktozidazı, doğal taşıyıcılardan kitin ve sentetik taşıyıcılardan iyon değiştirici reçinede ( Amberlite IRA-938 ) immobilize edilmiştir. Kullanılan kovalent bağlama ile immobilizasyon metodları ve taşıyıcı tipleri kıyaslanarak, belirlenen uygun metodla immobilize edilen alpha- galaktozidazın fiziksel ve kimyasal karakterizasyonu gerçekleştirilmiştir. Taşıyıcılar önce 1.1' - karbonildiimidazol (CDI ) ile aktive edilmiş, ardından enzim ya direkt olarak yada uzatıcı bir kol ( alpha - aminobütirikasit; GABA ) ile taşıyıcıda immobilize edilmiştir. İmmibolizasyon çalışmalarının optimizasyonu yapıldıktan sonra elde edilen sonuçlar doğrultusunda, CDI ile aktive edilen taşıyıcılardan kitinde direkt olarak immobilize edilen alpha- galaktozidaz enziminin fiziksel ve kimyasal karakterizasyonu gerçekleştirilmiştir. Enzim aktivitesine bazı parametrelerin ( protein miktarı, inkübasyon süresi, pH, sıcaklık ve substrat konsantrasyonu ) etkisi incelenerek kararlılık testleri ( termal, pH, depo ve operasyonel kararlılık ) yapılmıştır. Bunların yanısıra immobilze enzimin tekrar kullanılabilirliği test edilerek rafinoz hidrolizinde kullanılabilecek uygun reaktör tipi belirlenmiştir.;Amberlite IRA-938, Citrullus Vulgaris, watermelon, alpha-galactosidase, immobilization, ion-exchange resin, chitin, isolation and purifacation of proteins, hydrolysis of rafflinose.;Amberlite, IRA-938, Citrullus Vulgaris, alpha- galaktozidaz, immobilizasyon, iyon değiştirici reçine, karpuz, kitin, protein izolasyon ve saflaştırılması, rafinoz hidrolizi.
Açıklama
Araştırma Projesi -- Ege Üniversitesi, 2000
