Aspergillus Brasiliensis'in sekonder metabolitlerinin saflaştırılması ve karakterizasyonlarının yapılması

Bu tez kapsamında Aspergillus brasiliensis'in sıvı kültür fermentasyonundan elde edilen süpernatant ve misel kaynaklı ham ekstrelerde ayrı ayrı olmak üzere üretilen sekonder metabolitler incelenmiş, saflaştırılmış ve saf haldeki sekonder metabolitlerin karakterizasyonları gerçekleştirilmiştir. Preparatif sıvı kültür fermentasyonları proje kapsamındaki önceki tez çalışması ile belirlenen optimum ortam koşullarında, YES (Yeast Extract Sucrose) sıvı kültür ortamında gerçekleştirilmiştir (Üretim için optimum koşullar: C/N oranı (32), sıcaklık (25 °C), pH (6) ve çalkalama hızı (210 rpm)'dir). Sıvı kültür fermentasyonundan elde edilen süpernatant ve misel yapıları filtre edilerek, her ikisi için de ham ekstrelerde bulunan sekonder metabolitlerin saflaştırma ve takiben karakterizasyon prosesleri için Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi (YPSK-DAD) profilleri, Flash Kromatografisi, İnce Tabaka Kromatografisi (İTK), Yarı-preparatif YPSK (Prep-YPSK) ve Nükleer Manyetik Rezonans (NMR) teknikleri kullanılmıştır. Yapılan çalışmalar sonucunda hidrofilik yapıda olan sekonder metabolitlerin ham ekstrelerin süpernatant fazında, hidrofobik yapıdaki sekonder metabolitlerin ise misel fazında yoğunlaştığı tespit edilmiştir. Bu durum sıvı kültür fermentasyonu sonucunda elde edilen süpernatant ve misel yapılarının sekonder metabolit profilleri açısından fark yarattığını ortaya koymuştur. Sonuç olarak Aspergillus brasiliensis türünden; misel ekstrelerinden 1 adet ve süpernatant ekstrelerinden 6 adet olmak üzere toplamda 7 adet saf madde elde edilmiştir. Elde edilen saf maddelerin yapıları sekonder NMR analizleri ile aydınlatılmıştır. NMR analizleri ile Aspergillus brasiliensis türünden saflaştırılan bu sekonder metabolitlerin Malformin A1, Malformin A3, Malformin B3, Malformin B4, Brasenol A1 ve İtakonik asit (9- HHIA ve 10- HHIA) yapıları olduğu tespit edilmiştir.

In this thesis, firstly crude extracts originating from supernatant and mycelium were deduced from the liquid culture fermentation of Aspergillus brasiliensis. Then, secondary metabolites separately obtained from these crude extracts were investigated, were made pure and the pure ones among the secondary metabolites are characterized. Preparative liquid culture fermentations were carried out in YES (Yeast Extract Sucrose) broth medium under optimum culture condition (optimal culture condition for production is: C/N ratio (32), temperature (25 °C), pH (6) and agitation Speed (210 rpm)) determined by the previous thesis work within the scope of the project. Filtration was performed for the supernatant and mycelium which were obtained from liquid culture fermentation. High Performance Liquid Chromatography (HPLC-DAD) profiles, Flash Chromatography, Thin Layer Chromatography (TLC), Semi-Preparative HPLC and Nuclear Magnetic Resonance (NMR) techniques were used for purification and characterization processes of secondary metabolites in crude extracts which were extracted from both types of extracts. As a result of the studies it has been observed that in supernatant crude extracts the hydrophilic metabolites were abounded whereas in mycelium crude extracts the hydrophobic metabolites were abounded. This situation reveal that the supernatant and mycelium obtained as a result of liquid culture fermentation processes differ from each other in the sense of secondary metabolite profiles. In conclusion totally 7 pure secondary metabolites, 6 from supernatant crude extracts and 1 from mycelium crude extracts, were obtained by Aspergillus brasiliensis species. The structures of the obtained pure secondary metabolites were elucidated with the analysis of NMR. NMR analysis show that these pure secondary metabolites obtained by Aspergillus brasiliensis species were in the types of Malformin A1, Malformin A3, Malformin B3, Malformin B4, Brasenol A1 and Itaconic acids (9- HHIA and 10- HHIA).