Fosfolipaz A2 enziminin afinite-ultrafiltrasyon ile saflaştırılması
Yükleniyor...
Dosyalar
Tarih
2006
Yazarlar
Dergi Başlığı
Dergi ISSN
Cilt Başlığı
Yayıncı
Ege Üniversitesi
Erişim Hakkı
info:eu-repo/semantics/openAccess
Özet
Fosfolipaz A2ʼler (PLA2; EC 3.1.1.4) fosfogliseridlerin sn-2 yağ asidi ester bağını hidrolizleyerek serbest yağ asitleri ve lizofosfolipitleri ayıran çeşitli enzim ailesidir. sn-2 pozisyonundaki yağ asidi çoğunlukla araşidonik asittir (AA). Prostaglandinler, prostasiklinler ve tromboksanlar siklooksigenaz yoluyla, lökotrienler lipoksigenaz yoluyla AAʼden sentezlenirler. PLA2 hidroliz ürünü olan lizofosfolipit hücre sinyal iletiminde, fosfolipidin yeniden modellenmesinde ve membranın bozulmasında çok önemlidir. Bu rollere ek olarak PLA2, son zamanlarda sistematik ve akut inflamator şartlardan kansere kadar değişen geniş bir patofizyolojik durumun içinde yer almakla tanınmaktadır. Gittikçe artan sayıdaki bir çok farmakolojik inhibitör fizyolojik koşullarda PLA2ʼlerin rolünü tanımlamaya yardımcı olacaktır. Bu sebeple farklı kaynaklardan PLA2ʼlerin saflaştırılması ve karakterizasyonu son derece önemlidir. Memeli PLA2 enzimleri büyüklükleri, salgılanma kapasiteleri ve kalsiyuma bağımlılıkları açısından sınıflandırılmak istenirse; düşük molekül kütleli Ca2+-bağımlı salgılanan enzimler(sPLA2), yüksek molekül kütleli Ca2+-bağımlı sitozolik enzimler (cPLA2) ve Ca2+- bağımsız enzimler(iPLA2) olarak sınıflandırılır. Memeli pankreası ve yılan zehirinde PLA2ʼler oldukça fazla miktarda bulunmaktadır ve bu nedenle saflaştırılmış ve kapsamlı olarak çalışılmıştır. Buna karşın, diğer hücre ve doku kaynaklarında da bulunan bu enzimler eser miktardadır ve iyi tanımlanmamıştır. Bu enzimler sığır bağırsağı, tavşan ve sıçan inflamator salgıları, sıçan ve insan plateletleri, sıçan dalağı, sıçan karaciğeri ve romatizmalı hastaların eklem sıvılarından saflaştırılmıştır. Bu çalışmada, üç farklı afinite reçinesi tarafımızdan sentezlendi. %Verim ve saflaştırma katı açısından en iyi sonucu kitosanglutaraldehid- substratla oluşturulan reçine verdi. Bu reçine, bir PLA2 substratı olan fosfatidiletanolaminin kitosanla ilişkilendirilerek suda çözünür makromoleküler bir reçinenin geliştirilmesi esasında gerçekleştirilmiştir. Ultrafiltrasyon teknikleriyle birlikte makroligand, sığır pankreasından PLA2ʼnin saflaştırılmasında kullanılmıştır. Reçineden bağlı PLA2ʼnin elüsyonu için optimum koşullar incelendi. Ayrıca saf enzimin bazı karakteristik özellikleri ve kinetiği belirlendi. Reçinenin tekrar kullanılabilirliliği de incelendi.
Açıklama
Anahtar Kelimeler
Pankreatik FosfolipazA2, PLA2 saflaştırılması, afinite-ultrafiltrasyon., Pancreatic PhospholipaseA2, PLA2 purification, affinity-ultrafiltration., Biyokimya A.B.D.
